elisa快速法检测血吸虫病人血清抗体的研究_1

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果ELISA快速法检测血吸虫病人血清抗体的研究为了提高ELISA的检测速度，使之更方便地应用于临床诊断及现场调查工作，根据ELISA的实验原理，我们设计了一种ELISA快速法，并初步应用于血吸虫病人血清抗体的检测，现报告如下。　　1　材料与方法　①日本血吸虫成虫抗原的制备　以1500条日本血吸虫尾蚴经皮肤感染家兔，45天后经门静脉灌注收集成虫，用生理盐水洗涤后用玻璃匀浆器匀浆，以1XX×g离心，收集上

2、清液，测定其蛋白含量。②酶联SPA结合物　购自卫生部上海生物制品研究所，临用前用1ml课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果PBS溶解。③血清　50份日本血吸虫病人血清来自江西省血吸虫病流行区，临用前分别用1∶2，1∶10；1∶20；1∶40的HRP-SPA液将血清稀释到1∶50的浓度。④ELISA快速法的建立　用的碳酸盐缓冲

3、液稀释日本血吸虫成虫抗原至80μg/ml，每孔50μl包被酶标板，4℃放置过夜，第二天用PBS洗涤三次后用含1%BSA的PBS液于37℃封闭45min，用PBST(含%Tween-20)洗板三次；在酶标板孔中分别加入用不同稀释度的酶联SPA稀释到1∶50的病人血清50μl，37℃反应60min，再用PBST洗板三次，加入底物邻苯二胺应用液50μl，37℃显色10min，加入2mol/L的硫酸溶液中止反应，观察结果，寻找最适的酶联SPA液的工作浓度。⑤检测血吸虫病人血清抗体　方法同④，酶联SPA的工作浓度为1∶40，病人血清的稀释度

4、为1∶50。⑥常规ELISA检测血吸虫病人血清抗体　按常规方法［1］，以每孔50μl日本血吸虫成虫抗原包被酶标板，4℃放置过夜，第二天用PBST洗板三次后用含1%BSA的PBS7℃封闭1小时，用PBST洗板后加入1∶50稀释的病人血清，37℃反应60min，用PBST洗板三次，再加入1∶40稀释的酶联SPA，37℃反应60min，洗板后加入底物邻苯二胺应用液，37℃显色10min，用2mol/L的硫酸终止反应，观察结果。　　2　结果与讨论　常规的ELISA检测血清抗体的方法是将已知的抗原包被在酶标板上，与血清中待测抗体结合后通过加

5、入酶联抗人IgG(HRP-IgG)或酶联SPA(HRP-SPA)显色的两个过程来完成的。HRP-SPA与血清中待测抗体结合的位点是Ig的Fc段，从理论上讲HRP-SPA与Ig的Fc段结合不会影响Ig的Fab段与抗原的结合，或者影响很小，因此可以设想将抗原与待测抗体反应的过程，待测抗体与酶标二抗反应过程在同一反应体系中同时进行，从而使整个反应过程减少一步，Sundaram等［2］根据这一原理设计了偶联探针Western课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本

6、学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果blot方法，取得了好的实验效果，我们依据相同的原理，设计了ELISA快速法，用于检测血吸虫病人血清抗体。用该法及常规ELISA同时检测50份江西省血吸虫病流行区病人血清标本，49份结果阳性，1份标本为阴性，阴性标本均为第7份标本，两种方法的检测结果完全一致。　　抗原与待测抗体反应的过程，待测抗体与酶标二抗反应过程在同一反应体系中同时进行，因病人血清中存在的非目标检测抗体会消耗一部分HRP-SPA，为达

7、到常规ELISA检测的敏感度，则可能需要增加HRP-SPA的用量，通过测定HRP-SPA的工作浓度与可检测出血清抗体滴度的关系，发现分别按1∶2，1∶10，1∶20，1∶40稀释的HRP-SPA，能测出混合阳性血清最高滴度均为1∶12800，与常规的ELISA的检出滴度相同，因此ELISA快速法并不需要增加HRP-SPA的用量，常规使用时只要按厂家推荐的1∶40的工作浓度使用即可获得满意的使用效果。　　ELISA快速法的抗体检测效果与常规ELISA相同，检测条件亦一致，检测时间则可明显缩短，可显著提高工作效率，对提高抗血吸虫抗体以

8、及其它血清抗体检测方法的检测速度方面将会有一定的实用价值。　　3　参考文献　　1　武建国主编.实用临床免疫学检验.1990：102-108.课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估