串联表达蛋白agl ig结合结构域及其在口蹄疫鉴别诊断中的应用

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1、ClassifiedIndex；Code：10224Confidential(yes／no)：110NO．：120610439DissertationfortheMasterDegreeTandemexpresslonpressionproteinproteinA／G／L-l-l■l-1●1·limmun02loDulinDindln2domainandapplicationforfoot——and--mouthdiseasedistinguishdiagnosisCandidate：PengTongquanSupervisor：P

2、rofossorWangJunweiDegreeCategory：MasterofAgricultureCollege：CollegeofVeterinaryMedicineFirstleveldiscipline：VeterinaryMedicineSecondleveldiscipline：PreventiveVeterinaryMedicineHarbinChinaJune2015万方数据————————————』』鹜——一Yllllll2llll7llll7lllll211219lllll6lUl一=!!!g目!目目目g目!

3、!!!!!!!!皇!目目!!!!!!_‘---●VV5目录摘要．I英文摘要．IIIl前言11．1金黄色葡萄球菌蛋白A一11．1．1SPA的简介．．11．1．2SPA的理化性质．．11．1．3SPA的结构特性．21．1．4SPA的生物学特性21．1．5SPA的免疫学应用21．2链球菌蛋白G．．31．2．1SPG简介31．2．2SPG的理化性质和结构特性．31．2．3SPG的生物学特性．41．2．4SPG的应用41．3大消化链球菌表面蛋白L．．．51．3．1PPL简介51．3．2PPL的理化性质和结构特性．51．3．3PPL的生物学活性

4、61．3．4PPL的应用．．61．4多物种共患传染病及检测方法71．4．1多物种共患传染病简介71．4．2口蹄疫71．4．3布鲁氏杆菌病81．5研究目的与意义92材料与方法一102．1材料．102．1．1重组质粒、菌株．102．1．2生物学试剂、血清和抗体102．1．3主要仪器．1l2．2方法．122．2．1重组蛋白[AGL]。基因的设计、串联、表达．．122．2．2串联AGL基因载体pET-30a(+)-[AGL]。的构建132．2．3[AGL]。蛋白的原核表达。142．2．4重组蛋白[AGL]。免疫球蛋白结合活性的鉴定152．2

5、．5标记蛋白与多种动物Ig结合活性分析．．16I万方数据东北农业大学农学硕士学位论文2．2．6【AGL]2-HRP应用于检测BolFN—n多克隆抗体．162．2．7【AGL]2-HRP应用于布鲁氏菌病和BVDV临床样品检测．．172．2．8【AGL]2-HRP用于8BF-ELISA173结果．．213．1重组克隆载体PET-30a(+)．AGL的构建213．1．1B．PPL多肽的基因优化213．1．2重组质粒pJWF．PPL的鉴定233．1．3重组克隆载体oET-30a(+)．AGL构建．233．2【AGL]。蛋白的表达和鉴定243

6、．2．1串联AOL基因表达载体pET-30a(+)-[AGLI。的构建243．2．2重组蛋白[AGL]。的诱导表达与纯化．．243．2．3重组蛋白[AGL]。的Westernbolt鉴定结果253．3酶标蛋白的制备与鉴定。273．3．1重组[AGL]2蛋白标记．273．3．2酶标蛋白活性检测．273．4酶标蛋白活性分析283．5酶标[AGLl2蛋白应用于检测BolFN．0t多克隆抗体303．6酶标蛋白用于布鲁氏杆菌病和BVDV临床样品检测．303．7酶标蛋白用于8BF．ELISA检测FMD方法的建立．．323．7．1AGL．ELIS

7、A相关条件确定．323．7．2AGL．ELISA重复性试验．．353．7．3AGL．ELISA特异性试验．353．7．4AGL．ELISA保存期试验．363．7．5AGL．ELISA与3ABC．I．ELISA试剂盒比较363．7．6AGL．ELISA检测猪血清、羊、鹿血清反应条件的确立363．7．7AGL．ELISA检测多种动物FMD临界值的确定373．8AGL．ELISA在临床检测中的应用384讨论．．404．1选取SPA、SPG、PPL单结构域的依据一404．2串联基因AGL的构建策略和生物信息学特征4l4．3AGL．ELISA

8、方法中动物血清相关条件的选择424．4AGL．ELISA在多物种共患病检测中的应用435结ij仑．．44弱!j射．．45参考文献．46攻读硕士学位期间发表的学术论文5lII万方数据CoNTENTSCoNTENTSAbstractinC