抗erbb2全人源单克隆抗体h

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1、研究生优秀毕业论文目录摘要．1Abstract．．．3缩略词表．5—1￡一—．L日U百．．7第一部分抗ErbB2全人源单克隆抗体H2—18抗肿瘤作用研究10一、实验材料10二、实验方法ll三、实验结果-．13四、实验结果分析与讨论17第二部分抗ErbB2全人源单克隆抗体H2—18抗肿瘤作用机制研究19～、实验材料19二、实验方法23三、实验结果25四、实验结果分析与讨论33全文结论40参考文献41综述46在读期间发表论文和参加科研工作情况说明55致谢56万方数据抗ErbB2全人源单克隆抗体H2．18在乳腺癌中的抗肿瘤作用及其机理摘要近年来乳腺

2、癌已经成为女性最常见的恶性肿瘤。每年乳腺癌的发病率都在不断攀升，其中以包括我国在内的发展中国家最为迅速。乳腺癌的死亡率一直居高不下，特别是ErbB2过表达的乳腺癌患者。ErbB2基因在25％．30％的乳腺癌患者的癌组织中有过度表达，此类ErbB2过表达的乳腺癌生长速度快、侵袭性强，易发生早期转移。对放、化疗不敏感，易复发。故无病生存期短，预后差。Trastuzumab，曲妥珠单克隆抗体，(商品名赫赛汀，Herceptin)，是由罗氏制药生产的靶向ErbB2受体胞外段结构域IV区的人源化IgGl型抗体，已于1998年获得美国FDA批准用于Erb

3、B2高表达转移性乳腺癌的治疗。但临床数据显示约70％的ErbB2过表达的乳腺癌患者对Trastuzumab治疗不产生反应，且大部分对Trastuzumab发生反应的患者也会在治疗开始1年内产生耐药。Pertuzumab，帕妥珠单克隆抗体，(商品名Perjeta)，是由罗氏制药生产的另一株靶向ErbB2受体胞外段结构域II区的人源化单克隆抗体。由于Trastuzumab抑制ErbB2同源二聚体和配体非依赖的异源二聚体，而Pertuzumab抑制配体依赖的ErbB2异源二聚体，两者具有互补的抗肿瘤作用机理，故其联合用药被FDA批准为一线治疗。尽管

4、临床试验证实Trastuzumab和Pertuzumab的联合用药在Trastuzumab耐药的患者中体现出一定的抗肿瘤活性，但其客观反应率仅为25％，而完全反应率低于8％。为了进一步提高ErbB2靶向抗体的疗效，我们通过筛选全人源噬菌体抗体库获得了一株靶向ErbB2受体胞外段结构域I区的全人源单克隆抗体_H2．18，并且惊奇地发现其能够强有力地诱导ErbB2过表达乳腺癌细胞发生程序性细胞死亡(Programmedcelldeath，PCD)。本文将深入研究H2—18在ErbB2过表达乳腺癌细胞，特别是在Trastuzumab耐药乳腺癌细胞中

5、的抗肿瘤作用，并分析其作用机理，尤其是阐述其诱导程序性细胞死亡的作用机制。通过MTS方法检测的细胞活力实验数据表明，虽然在Trastuzumab敏感细胞BT474和SKBR-3中，H2—18的作用效果逊色于Trastuzumab+Pertuzumab联用组及Trastuzumab单药组，但在Trastuzumab耐药细胞HCCl954及HCCl419中的作用效果却是最强的。并且其活力抑制率与其在敏感细胞中的相似，并未受耐药机制影响，暗示H2．18的作用机制不同于Trastuzumab。流式AnnexinV及PI双染法结果显示在Trastuzu

6、mab敏感及耐药细胞中，H2．18皆能明显诱导其死亡，死亡细胞主要位于右上双阳性区。而其他抗体组万方数据第二军医大学硕士学位论文不能产生这种作用。在体内实验中，我们构建了Trastuzumab耐药乳腺癌荷瘤裸鼠模型，通过对肿瘤大小及生长速度的观察，评价出H2—18组较其他抗体组具有明显优势。在对H2．18诱导程序性细胞死亡的机制研究中，我们利用TEM观察细胞形态，发现其不具有凋亡的特征，却与坏死更相似。并且这是一种caspase非依赖的，Bcl．2家族没有参与调节的程序性坏死。进一步的研究发现，此死亡通路由激活受体相互作用蛋白1(recept

7、orinteractingprotein1，RIPl)而触发，导致活性氧簇(ReactiveOxygenSpecies，ROS)产生增加。升高的ROS激活JNK通路，JNK被磷酸化激活后转位入核，磷酸化其底物c．Jun，活化的c—Jun最后通过转录水平的调节实现细胞的程序性死亡。H2．18能够有效抑制ErbB2过表达乳腺癌的生长，特别是Trastuzumab耐药乳腺癌的生长；并且因其具有独特的PCD诱导活性，有望成为新的乳腺癌靶向治疗候选药物；本研究还将为设计更为有效的ErbB2靶向治疗性抗体提供新的思路。关键词：ErbB2，乳腺癌，全人源单

8、克隆抗体，程序性细胞死亡万方数据抗ErbB2全人源单克隆抗体H2．18在乳腺癌中的抗肿瘤作用及其机理AbstractBreastcancerbecomesthemo