石菖蒲抑酶活性的实验研究

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1、石菖蒲抑酶活性的实验研究【摘要】目的建立体外抑制乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AchE)活性实验方法，探讨石菖蒲抑酶活性及活性部位。方法提取制备石菖蒲根和叶的乙醚、醋酸乙酯及正丁醇萃提液，以石油醚-醋酸乙酯(85∶15)为展开剂，对石菖蒲根和叶的乙醚萃提液层析分离后进行抑制AChE活性试验，采用分光光度法分别测定石菖蒲根和叶醋酸乙酯及正丁醇萃提液的AChE抑制率。结果石菖蒲根和叶的挥发油在薄层板显示有显著抑酶斑点，石菖蒲根和叶的乙醚萃提液薄层色谱中与α-细辛醚和细辛醚对应的显著抑酶斑

2、点比移值为Rf0和Rf(0.64±0.01)[t=(17±2)℃];石菖蒲根和叶的醋酸乙酯及正丁醇萃提液酶抑制率分别为39.17%，18.45%，24.33%和1.74%;石菖蒲根的水溶液无明显抑酶斑点但测定仍有较弱酶抑制率，石菖蒲叶的水溶液无抑酶斑点且两者均显示蓝色斑点。结论石菖蒲根和叶的挥发油具较强抑制AChE活性，其中α-细辛醚为强抑酶活性成分，石菖蒲根醋酸乙酯和正丁醇萃提液抑酶活性分别较石菖蒲叶强，石菖蒲根水溶液有微弱抑酶活性而叶的水溶液无抑酶活性，但两者的水溶液均有酶促作用的成分。该法作为一种体外抑

3、酶(AchE)活性实验，结果与文献报道的体内抑酶实验一致【关键词】石菖蒲;体外;乙酰胆碱酯酶;抑酶活性;α-细辛醚　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheinhititoryeffectofAcorustatarinouiiSchottanditsactivepart.MethodsThesolutionsofrootsandleavesAcorustatarinouiiSchottentsofAchEinhibitionether-aceticether(85:15).Det

4、erminationoftheAchEinhibitionpercentageetry.ResultsThevolatileoilofrootandleaffromAcorustatarinouiiSchottarkedarkedeAcorustatarinouiiSchottafterextractionbyaceticetherandn-butyricalcoholarkedAcorustatarinouiiSchotthasstronginhibvtiryeffectonAchEactivityandα

5、-asaroneoterintheirg加无水乙醇溶解定容于20ml)与牢固蓝B(fastblueBsalt)试液(牢固蓝B20mg加16ml水溶解)，按1∶4(V/V)混合。　　2.3样品制备　　2.3.1药材处理将采集的石菖蒲洗净晾干，剪断为根和叶两部分，低温干燥，分别粉碎成粗粉备用，石菖蒲药材粉碎后过40目筛，备用。　　2.3.2样品提取取石菖蒲根和叶粗粉约20g，分别置挥发油提取器，加水150ml提取约1h，静置冷却提取液。　　2.3.3样品液制备分别将上述石菖蒲根和叶挥发油提取液置分液漏斗，各加乙醚

6、10ml萃取，分取乙醚层;将剩余液依次分别用醋酸乙酯和正丁醇各10ml分2次萃取，合并萃取液，即得①石菖蒲根乙醚液，②石菖蒲叶乙醚液，③石菖蒲根醋酸乙酯液，④石菖蒲叶醋酸乙酯液，⑤石菖蒲根正丁醇液，⑥石菖蒲叶正丁醇液，⑦石菖蒲根水层液，⑧石菖蒲叶水层液;石菖蒲药材样品液制备按资料[7]操作。　　2.3.4对照品液制备精密称取α-细辛醚和细辛醚原料适量，分别加乙醚溶解，制成1mg·ml-1的溶液。　　2.4抑酶活性预实验用微量点样器吸取样品液①～⑧各10μl,点于普通硅胶G-CMC板,按酶抑制法[8]试验,结果

7、①②白色斑点极明显，③④白色斑点较明显，⑤⑥白色斑点不明显，⑦⑧无白色斑点且显蓝色斑点。　　2.5薄层分离抑酶实验　　2.5.1薄层层析取2块硅胶G-CMC板，平行操作，分别吸取样品液①和②各10μl,α-细辛醚和细辛醚对照液各5μl，点于同一硅胶G-CMC板,其中1块点石菖蒲药材液，置层析缸中,以石油醚-醋酸乙酯(8.5∶1.5)为展开剂，饱和10min后上行展开,完毕，取出自然挥干溶剂，不点石菖蒲药材液的板喷5%的香草醛硫酸溶液显色。结果见色谱图1。其中样品与α-细辛醚对照品在Rf0和Rf(0.65±0.

8、02)斑点一致，样品与细辛醚在Rf0和Rf(0.65±0.05)斑点一致。　　2.5.2酶抑制实验取上述薄层层析后未显色层析板，按酶抑制法[8]试验。结果见图2。其中样品与对照品在Rf0、Rf(0.65±0.02)和Rf(0.65±0.05)有对应抑酶斑点。　　图1薄层色谱图(t=17±2℃)图2抑酶色谱图　　2.6酶抑制率测定　　2.6.1吸收曲线取“2.1”项酶试液加去离子水(-4℃冷藏)稀释(