术前放化疗对直肠癌血管生成的影响及其临床意义

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1、术前放化疗对直肠癌血管生成的影响及其临床意义.L.编辑。作者：王永兵缪旭东黄胜郁宝铭张敏张玉豪【摘要】目的研究术前放化疗对直肠癌血管内皮生长因子（vascularendothelialgroicrovesseldensity,MVD）表达的影响。方法78例低位直肠癌患者，随机分为两组。术前放化疗组（治疗组）予放疗40Gy，同时给予FOLFOX4方案化疗两次，放疗结束后4～6周接受手术治疗，对照组入院后直接接受手术，手术标本在常规病理检查的同时作肿瘤组织VEGF和MVD的表达分析，用半定量计分方法计算VEGF表达，用VD记数。结果

2、VEGF积分治疗组为1.05±0.35,对照组为1.91±0.78,P＜0.01；MVD值治疗组为12.6±3.45，对照组为23.8±7.67，P＜0.01；治疗组肿瘤缩小，手术切除率和保肛率高于对照组。结论术前放化疗可明显抑制肿瘤组织的VEGF和MVD表达，并有术前降期作用。【关键词】直肠肿瘤;放射治疗;血管内皮生长因子;微血管密度[Abstract]ObjectiveToresearchtheinfluenceofchemotherapyandradiotherapybeforeoperationonthemicroves

3、seldensity(MVD)andvascularendothelialgrololy.Patientsinthetherapygroupreceivedradiotherapyfor40Graysasotherapyfortission.Allthespecimenobtainedfromoperationunderortissues.Asemiquantitativemethodorshrinking,resectionandanussparingofthetherapygroupotherapyandradiothera

4、pybeforeoperationcanrepressthegeneexpressionofVEGFandMVDintumortissues,andhaddoor;Radiationtherapy;Vascularendothelialgro），术前Hildebrandt和Feifel法超声分期为T3、T4期，无糖尿病和严重高血压（可能影响微血管）。随机将本组病例分为两组：治疗组（术前放化疗组）37例，和对照组（直接手术组）41例。两组的年龄、病理、超声分期无统计学差异。1.2标本获得治疗组病例入院后先予放疗，放疗设备为美国GE

5、公司医用电子直线加速器，10MVX射线，采用前后对穿固定野照射。照射范围上界为腰5骶1，下界为闭孔下缘，两侧为髂外1cm，前后两野对穿照射；剂量：2Gy/次，5次/周，连续4周，总计量为40Gy，同时FOLFOX4方案化疗2次，放疗结束后4～6周手术。对照组入院后检查无手术禁忌证即行手术。两组手术方式视术中情况行Doxin、Miles、Park、Hatman或肠造瘘，获得的病理标本在常规石蜡切片的同时做VEGF和MVD免疫组化测定。1.3实验方法及步骤1.3.1实验试剂VEGF单克隆抗体、VIII因子相关抗原(FVIIIAg)

6、多克隆抗体及链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶免疫组织染色试剂盒均购自福州迈新生物技术公司。1.3.2实验步骤取以上病例术后根治标本，经10%福尔马林固定，在肿瘤深处和边缘切取标本进行常规石蜡包埋，5μg厚连续切片，分别进行HE染色及免疫组化染色。切片经二甲苯脱腊后，酒精梯度水化，入0.3%H2O230min阻断内源性过氧化物酶活性，然后入0.01mmol/L、pH为6.5的94℃枸橼酸盐缓冲液15min以暴露修复抗原，降至室温后，羊血清封闭10min以封闭非特异性抗原，分别滴加鼠抗人Ⅷ因子相关多克隆抗体（1∶100稀释），鼠抗人V

7、EGF单克隆抗体（1∶200稀释）后4℃冰箱过夜，次日洗去一抗后，再依次加入二抗、三抗工作液各37℃孵育1h，洗去后经DAB工作液显色10min，苏木素复染30s,脱水，透明，封片。实验严格按说明书操作，用PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。1.3.3结果判定VEGF的判断使用半定量计分方法[2]，VEGF表达阳性为胞质染成黄色颗粒，以细胞阳性百分率得分之和进行判定，随机选择5个高倍视野（×400）进行判断:无染色计为0分，浅黄色计为1分，棕黄色计为2分，黄褐色计为3分，并统计表达阳性率。微血管计数采用VD，每个

8、与邻近微血管明显分离的阳性染色的血管内皮细胞或血管内皮细胞簇都视为独立的微血管，只要结构不相连，其分支结构也计作一个血管计数，而直径大于8个红细胞的血管，有厚的平滑肌的血管和硬化区的血管不在计数范围内。1.4统计学处理采用SPSS12.0专用统计软件包对数据进行