附子回阳救逆量效关系的实验研究

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1、附子回阳救逆量效关系的实验研究作者：邓家刚，范丽丽，郝二伟，柳俊辉【摘要】目的探讨附子回阳救逆功效的量效关系，为临床安全用药提供客观实验依据。方法制备附子供试药液，测定酯型生物碱乌头碱含量、半数致死量，筛选附子有效剂量范围，分别测定失血性休克大鼠模型平均动脉压(MAP)、心率(HR)，心动过缓小鼠模型HR，统计实验数据绘制量效关系曲线，线性回归分析附子不同剂量与相应实验指标的相关性。结果附子供试药液酯型生物碱乌头碱的含量为0.0364%，LD50=31.24g/kg;附子能显著扩张血管升高MAP，加快

2、HR，在0.5～6g/kg剂量范围内，剂量与其升高MAP作用呈正相关，在0.5～4g/kg剂量范围内，剂量与其加快HR作用呈正相关;附子能显著对抗心动过缓，在0.72～2.89g/kg剂量范围内，剂量与其对抗普萘洛尔所致心动过缓作用呈正相关。结论附子回阳救逆功效显著，且在一定剂量范围内存在量效关系，一旦超出相应剂量范围动物易出现毒性反应，影响实验动物存活率，提示附子临证用药的可能安全范围为5.56～44.44g/d。【关键词】附子;回阳救逆;量效关系;相关性　　Abstract：ObjectiveTo

3、inquirethedose-effectrelationshipofChinesemedicinepreparedaconiteroot(PAT)ontheeffectofrevivingthe"Yang"forresuscitation,andtoprovidetheexperimentalbasisforsecurityadministration.MethodsPATentationmethod.AP、HR.低温超速离心机，湖南塞特湘仪有限公司生产。　　2方法　　2.1酯型生物碱乌头碱的含量测

4、定附子供试药物中酯型生物碱含量的测定方法依《中国药典》2005版制定[1]。　　2.1.1对照品溶液制备精密称取乌头碱对照品20mg，置于10ml容量瓶中，用无水乙醇溶液并稀释至刻度。　　2.1.2标准曲线制备精密量取对照品溶液0.25，0.50，1.0，1.5，2.0，2.5ml，分别置25ml量瓶中，均无水乙醇使成2.5ml，各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml，摇匀，在60～65℃水浴中保温10min，放冷，加高氯酸铁试液13ml，摇匀，放置5min，精密加入高氯酸试液8ml，用高氯酸铁试液稀释

5、至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在520nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。　　2.1.3测定法精密量取样品10ml，低温蒸干。残渣加三氯甲烷2ml使溶解，转入分液漏斗中，用0.05mol/L硫酸溶液提取3次，每次5ml，酸液依次用同一三氯甲烷10ml振摇洗涤，合并酸液，加氨试液调节pH值至9，再用三氯甲烷提取3次，每次10ml。三氯甲烷液依次用同一水20ml振摇洗涤，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加无水乙醇适量使溶解，转入5ml

6、量瓶中，用无水乙醇分次洗涤容器，洗涤液并入量瓶中，再加无水乙醇至刻度，摇匀。精密量取上述溶液及无水乙醇空白溶液各2.5ml，分别置25ml量瓶中，照“2.1.2”标准曲线的制备项下的方法，各“各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中酯型生物碱乌头碱的重量(μg)，计算，即得。　　2.2附子急性毒性实验　　2.2.1预试验昆明种小鼠20只，体质量(20±2)g，随机分成5组，每组4只，选择5组剂量的中药附子水煎醇沉液，每只小鼠以0.4ml样品溶液进行灌胃，观

7、察小鼠出现中毒反应的症状并记录死亡数，分别找出各样品Dm值(100%死亡量)与Dn值(0%死亡率)。　　2.2.2正式实验昆明种小鼠50只，体质量(20±2)g，雌雄各半，按体质量和性别随机分成5个组，每组10只，以Dm和Dn值，根据分组及剂量比值公式确定组间剂量比值，配成5种浓度，每只0.4ml灌胃给药，给药后观察7d，观察和记录有无异常反应和死亡情况，计算LD50。　　2.3附子剂量对失血性休克大鼠MAP和HR的影响[2]SD大鼠，清洁级，雌雄各半，体质量(250±20)g。大鼠称重，腹腔注射乌拉

8、坦麻醉后，仰卧固定四肢，尾静脉全身肝素化。接好心电图II导联，连接BL-410生物机能系统检测HR。大鼠行右颈总动脉插管，接换能器以监测MAP。分离十二指肠以备给药。在20min内放血至MAP35～40mmHg(1mmHg=0.133kPa)，稳定不再回升即为放血终点，记录HR值。随机分为空白对照组、模型对照组、附子各剂量组，每组10只。于十二指肠分组给药，对照组给等量生理盐水，观察记录MAP值和HR值。　　2.4附子剂量对心动过缓小鼠HR的影响[3]昆