骨髓间充质干细胞对肌腱移植物在骨隧道内愈合效果及示踪的实验研究

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1、骨髓间充质干细胞对肌腱移植物在骨隧道内愈合效果及示踪的实验研究.L.编辑。作者：董佩龙，吴小涛　李永刚，张绍东，潘永飞，曹烨，严慧深【摘要】　　目的观察骨髓间充质干细胞对肌腱移植物在骨隧道内愈合的影响，并为干细胞的标记示踪提供实验依据。[方法]采用贴壁分离筛选法获取大鼠的骨髓间充质干细胞(bonemesenchymalstemcells,BMSCs)，用超顺磁性氧化铁(superparamagicironoxide,SPIO)和DiI(1,1’dioctadecyl-3,3,3’,3’tetramethylindo

2、carbocyanineperchlorate)对其标记。39只8周龄雄性SD大鼠随机分为两组，实验组21只，对照组18只。实验组在骨隧道内腱-骨结合面注入含双标的BMSCs和PluronicF127载体，对照组只注入载体，术后2、4、8周进行生物力学评估愈合效果，实验组2、4、8周组织冰冻切片荧光显微镜和手术后即刻、3、7d行7.0TMR示踪移植的BMSCs。[结果]SPIO、DiI能有效标记干细胞。实验组2、4、8周荧光显微镜观察在腱骨界面有DiI标记的阳性细胞存在。7.0TMR未能在实验组腱骨界面观察到明显信号

3、改变。生物力学最大拔出载荷实验组和对照组在术后2周无统计学差异，在4、8周实验组显著高于对照组(P<0.05)。[结论]移植的骨髓间充质干细胞可以促进骨隧道内腱骨结合部的早期愈合，DiI能有效标记示踪干细胞，SPIO能有效标记干细胞，但在该实验模型中7.0TMR可能不能活体示踪磁粒子标记的干细胞。【关键词】骨髓间充质干细胞骨隧道腱-骨结合部超顺磁氧化铁DiI示踪　　Abstract：[Objective]Toevaluatetheeffectofbonemesenchymalstemcells(BMSCs)onh

4、ealingoftendonbonejunctioninabonetunnelandtoprovideexperimentalevidenceoflabelingandtracingthestemcell.[Method]BMSCsfromratsethodandlabeledbySPIOandDiI.Thirtynine8lydividedintotentalgroupand18ratsinjectedechanicalanalysisicroscopeat2,4,8icroscopeat2,4and8echa

5、nically,maximumpulloutloadhadnostatisticaldifferencebetentalgroupandcontrolgroupat2entalgrouphadsignificantlyhighermaximumpulloutloadparedagicallylabeledBMSCsinvivointheexperimentalmodel.　　Keyesenchymalstemcells;bonetunnel;tendonboneinterface;superparamagiciron

6、oxide;DiI;tracing　　交叉韧带重建后早期最薄弱的部位是骨隧道内腱骨结合部，促进其早期愈合一直是学者们研究的热点之一。Pittenger等[1]研究表明，BMSCs在一定的诱导条件下可以分化成脂肪细胞、神经细胞、造血细胞、肌腱细胞、成纤维细胞、内皮细胞等多种细胞，正是其多向分化的特性，使治愈不可逆病变的疾病成为可能。Ouyang、Lim等[2，3]发现BMSCs能提高骨隧道内腱骨结合部的愈合。但由于缺少对BMSCs的标记和示踪，移植到体内的BMSCs的存活及分布情况仍不清楚。本实验将双标的BMSCs移植入

7、大鼠关节外骨隧道内腱-骨模型中，用组织冰冻切片荧光显微镜和7.0T磁光振仪(MR)对其示踪，并用生物力学试验评价早期愈合效果。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　1.1.1实验动物6周龄雄性SD(spraguedaodifiedEagle’smedium,DMEM)培养液(Gibco公司，美国);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所);胰酶(Amresco公司，美国);普鲁士蓝试剂盒(上海虹桥乐翔医用试剂公司);DiI(MoleculProber，美国);PluronicF-127(Sigma公司，美国)。　　1.

8、1.3主要设备CO2培养箱(Herabus公司，德国);倒置相差显微镜(ZEiss公司，德国);净化工作台(吴江市生化净化设备厂);细胞培养瓶(Corning公司，美国);7.0T磁共振仪(Bruker公司，德国);CSS-44020型生物力学试验仪(长春仪器厂)。　　1.2实验方法　　1.2.1大鼠BMSCs的体外分离、培养和传