sirna对大鼠钙调神经磷酸酶活性及vsmcs增殖的影响

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1、SiRNA对大鼠钙调神经磷酸酶活性及VSMCs增殖的影响作者：林瑶，牛勃，解军，颜真【关键词】,RNA干扰；神经肽Y；钙调神经磷酸酶；肌,平滑,血管/细胞学　　InhibitoryeffectofsiRNAoncalcineurinactivityandvascularsmoothmusclecellproliferationinrats　　【Abstract】AIM:Tostudythechangesofcalcineurin(CaN)activityandcfosexpressionlevelintheproliferationofratvascularsmoothmusclece

2、lls(VSMCs)stimulatedbyneuropeptideY(NPY),andtheinhibitionofsiRNAontheactivityofCaNandtheproliferationofVSMCs.METHODS:VSMCsfromthoracicaortainratsaryculture.VSMCsulatedbyNPY,thentheactivityofCaN,theproliferationofVSMCsandtheexpressionlevelofcfosulatedbyNPY,ulatedbyNPYbyinhibitingtheactivityofCaN.

3、　　【Keyuscle,smooth,vascular/cytology　　【摘要】目的：观察神经肽Y(NPY)刺激的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中钙调神经磷酸酶（CaN）活性和cfos表达水平的变化，以及RNA干扰抑制CaN活性的作用.方法：采用组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞；NPY刺激培养的大鼠VSMCs增殖；RNA干扰特异性抑制CaN的活性及其mRNA的表达，阻断NPY刺激的大鼠VSMCs中CaN依赖的信号转导通路，观察对CaN活性、细胞增殖、核内原癌基因cfos表达水平的变化.结果：NPY可增加VSMCs的CaN活性，加快细胞增殖及增加核内cfos表达水平

4、.RNA干扰抑制CaN活性后，明显降低NPY刺激的VSMCs增殖及核内cfos表达水平.结论：CaN参与了NPY刺激的VSMCs增殖，RNA干扰通过抑制CaN的活性可阻断NPY诱导的VSMCs增殖作用.　　【关键词】RNA干扰；神经肽Y；钙调神经磷酸酶；肌，平滑，血管/细胞学　　0引言　　钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)属丝氨酸苏氨酸蛋白磷酸酶家族成员，在细胞信号传递过程由Ca2+直接调节，具有去磷酸化作用.目前认为，CaN是一种广泛分布于脑、心肌、骨骼肌、T淋巴细胞、血管平滑肌和心血管内皮等组织细胞中，参与多种细胞功能［1］，心肌肥大、血管平滑肌细胞(vascular

5、smoothmusclecells,VSMCs)增殖和内皮细胞功能的调节［2］.Ca2+是调节VSMCs功能活动的重要信号传导递质，可介导多种神经体液因素、细胞因子等的信号传递，刺激核内多种原癌基因表达，进而激活增殖相关基因转录，促进细胞蛋白质合成，引起细胞增殖［3］.但胞内Ca2+浓度变化与核内增殖基因活化的偶联机制尚不十分清楚.我们采用细胞培养，RNA干扰，免疫组化等技术，探讨神经肽Y（neuropeptideY,NPY)刺激VSMCs后的细胞增殖，细胞内CaN活性和cfos表达水平的变化，以及RNA干扰抑制CaN活性后，对NPY刺激的VSMCs增殖及CaN活性和核内cfos表达水

6、平的影响.　　1材料和方法　　1.1材料健康雄性SD大鼠，体质量(220±30)g，由第四军医大学实验动物中心提供；DMEM培养基干粉，胎牛血清(FBS)，牛血清白蛋白(BSA)均购于美国Gibco公司；对硝基磷酸酚，SMαactin抗体，TRITC标记山羊抗鼠免疫球，蛋白胰酶,NPY,MTT均购于美国Sigma公司；CaN测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；cfos免疫试剂盒购于北京中山生物技术有限公司；沉默基因TMU6RNA干扰试剂盒为美国Promega公司产品.　　1.2方法　　1.2.1制备CaNAβmRNA的siRNA在GeneBank中查找CaNAβmRNA序列（NO.B

7、C114525）,根据该序列确定SiRNA的靶标序列，再参照该靶标序列的互补序列，设计siRNA的对照序列及其互补序列（应用Promega公司针对SilentgeneTMU6CassetteRNAInterferenceSystem的特定siRNA设计软件，均为DNA引物,经过Blast基因同源性分析以保证其特异性）.序列种类和其核苷酸序列见表1.　　表1实验所用的序列种类及其核苷酸序列（略）　　l.2.2大鼠主动脉平滑肌细胞培养SD大鼠颈动脉