水杨梅根提取物的体外抗肿瘤活性

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1、水杨梅根提取物的体外抗肿瘤活性作者：叶勇涂先琴宋兴文施敏荣江虹【摘要】　　［目的］分离筛选水杨梅根中抗直肠癌细胞活性部位。［方法］采用系统溶剂法对水杨梅根水提取物进行分离，应用MTT比色法对分离得到的部位进行体外抗肿瘤活性的测定。［结果］乙酸乙酯提取物对直肠癌LS174T细胞表现出较强的抑制作用，在测定浓度范围内呈现出良好剂量依赖性抑制作用，而正丁醇和氯仿提取部位的抑制作用较弱。［结论］乙酸乙酯提取部位是水杨梅抗肿瘤主要的活性部位。【关键词】MTT法水杨梅根直肠癌　　Abstract：［Objective］Toscreentheanticancerfractionfro

2、mextractofrootofAdinarubellaHance.［Methods］ToseparatetherootofAdinarubellaHancebydifferentsolvens，thendeterminethEiranticanceractivitiesofthedifferentextractsinvitroethod.［Results］TheethylacetateextractstronglyinhibitedcellproliferationofLS174T,andshoextractshorootofAdinarubellaHance．　　K

3、eyl)，链霉素(100μg／ml)，RMPI1640培养液传代培养，实验用细胞均处于对数生长期。　　13药品与试剂RPMI一1640培养基为Gibco公司产品；小牛血清为四季青公司产品；MTT和DMSO均为AM．RESCO公司产品，其余试剂均为分析纯。　　2方法　　21水杨梅有效成分提取与配制干燥水杨梅根1kg，加入5000ml蒸馏水，90℃煎煮2h,过滤,滤渣再加3000ml蒸馏水继续90℃煎煮2h,过滤，将两次滤液合并后浓缩到1500ml。依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取。每次加入溶剂1/2体积萃取2次，各部分萃取液于旋转蒸发器上浓缩并回收溶剂，浓缩液挥干溶剂

4、后称重，计算得率。所得的各提取物分别用二华南理工大学自然科学基金资助项目（322-E5041170）；学生研究计划SRP项目（B10-Y13014）甲基亚砜(DMSO)配成lg／ml，分装于4℃保存，临用时用培养液稀释成所需浓度，并使各组所含DMSO终浓度≤0.1％。　　22MTT法采用　　3结果　　31不同溶剂提取率系统溶剂法分离提取部位各提取部位称重，计算得率(相对于总提物)，结果氯仿、乙酸乙酯、正丁醇部位的得率分别为0096%，026%和129%。　　32各提取部位对人直肠癌LS174T细胞的增殖抑制作用24h水杨梅根对直肠癌细胞作用效果表明，在10~

5、1000μg／ml浓度范围内，乙酸乙酯提取部位对人直肠癌LS174T细胞的增殖具有抑制作用；而氯仿和正丁醇提取部位的抑癌作用活性很低。通过延长各提取部位对人直肠癌LS174T细胞的作用时问及增加它们的实验浓度梯度，结果表明，不同浓度的各提取部位处理LS174T细胞，随浓度增加其抑制率也增加，在测定浓度范围内表现为剂量依赖性抑制。其中乙酸乙酯提取部位对人直肠癌LS174T细胞的增殖具有明显的抑制作用，而氯仿和正丁醇部位的抑癌作用不明显。结果见表1、2。　　表1水杨梅根提取物对LS174T作用24小时后各组OD值和抑制率(略)　　与空白对照组相比，**P<001　　

6、表2水杨梅根提取物对LS174T作用48小时后各组OD值和抑制率(略)　　与空白对照组相比，*P<005，**P<001　　33各提取部位对人直肠癌LS174T细胞增殖抑制作用的比较通过改良的Karber公式计算48h各提取部位的IC50值。乙酸乙酯提取部位的IC50为48357μg/ml，而正丁醇、石油醚提取部位的IC50分别是89026μg/ml和73033μg/ml。比较各提取部位对人直肠癌LS174T细胞的IC50值，发现乙酸乙酯提取部位对人直肠癌LS174T细胞增殖抑制作用最强，正丁醇提取部位次之，氯仿提取部位抑癌作用则不明显。由此提示

7、水杨梅抗直肠癌LS174T细胞的有效部位可能在乙酸乙酯及正丁醇部位，其中乙酸乙酯提取物是最主要的活性部位。　　4讨论　　目前，直肠癌的主要治疗手段是手术治疗和化疗。手术治疗对病人带来生活的不便和心理上的痛苦，化疗又存在较强的毒副作用。因此寻找既有较好疗效而又无明显毒副作用的中药，单独使用或联合化疗以提高疗效和减少毒副作用，是直肠癌防治的必然趋势。临床实验表明水杨梅根能抑制消化道肿瘤，为其成分研究提供了前提。本研究则揭示水杨梅根主要活性成分存在于乙酸乙酯提取物中，表明它可能是酚性化合物。因此下一步的研究将针对乙酸乙酯提取物作进一步分离，从而