原发性肝癌的基因治疗进展

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1、原发性肝癌的基因治疗进展【关键词】原发性肝癌；基因治疗；RNA干扰原发性肝癌(Primaryhepaticcarcinoma，PHC)是常见的恶性肿瘤之一。目前对PHC主要治疗方法有手术治疗、放疗、化疗以及综合治疗等，然而治疗效果并不理想。随着分子生物学和免疫学技术的发展，基因治疗技术在肿瘤的治疗中具有广阔的前景。基因治疗的方式有两类，一类为基因矫正和置换；另一类为基因增补，不去除异常基因，而是通过外源基因的非定点整合，从而补偿缺陷基因的功能，达到治疗目的。本文就原发性肝癌的基因治疗进展综述如下。1反义基因治疗　　肝癌的发生、发展过程中许多癌基因及生长因子

2、的基因产物大量表达，应用反义核酸在转录水平和翻译水平阻断某些基因的异常表达，以期阻断癌细胞内的异常信号传导，使癌细胞进入正常分化轨道或引起细胞凋亡，从而抑制肿瘤的生长。反义基因包括反义RNA、反义DNA和核酶3类。根据碱基互补的原理，利用与目标基因特定序列互补的短链核苷酸片段来封闭目标基因表达，或利用核酶与相应的mRNA结合使其降解，均可达到基因治疗的目的。MC7721肝癌模型取得了明显的抗癌作用，减少了AFP的表达，抑制SMMC7721细胞的增生。有研究显示［2］，引用反义胰岛素养生长因子(InsulingroplexVirusThymidineKi

3、nease，HSVTK)转染肿瘤组织，则该细胞的HSVTK将前体药Gancyclovir(GCV)转化为对分裂细胞有杀伤作用的代谢产物，特异性杀伤肿瘤细胞，对肝细胞肝癌在体外有一定的疗效。yc，Cest2，IGFⅡR以及CSF1等，在所有的抑癌基因中p53基因的突变率较高，它的失活会阻止细胞进入凋亡，从而使之处于持续分裂状态而增加突变及转化的概率。通过恢复或添加肿瘤细胞中失活或缺乏的抑癌基因，恢复抑癌基因的功能，从而抑制肿瘤的生长和转移，常用野生型p53、p16等。p53基因的突变或者失活不仅使细胞本身周期失调具有致瘤性，并且可以影响细胞对其他凋

4、亡信号如TGF的感受性下降。穆红等［7］使用p53cDNA的真核表达质粒p53pcDNA3对人源性肝癌细胞系HepG2进行转染，采用RNA原位杂交的方法证明了外源p53cDNA在HepG2p53细胞中的转染和转录，成功导入的p53cDNA可诱导HepG2细胞发生凋亡。p16基因也为抑癌基因，原发性肝癌中p16基因也常表现失活，p16基因能阻抑细胞生长于G1S期，但不诱发凋亡。p16启动子甲基化后，肝癌发生概率明显提高，尤其对于HBV感染者。5抗血管生成基因治疗　　肿瘤血管生成是肿瘤生长转移的关键步骤，是促血管生成因子和抑制因子作用失衡的结果。肿

5、瘤血管生成是由肿瘤细胞和肿瘤浸润炎症细胞，如巨噬细胞或肥大细胞产生的促血管形成因子所介导的。恶性肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的形成，为了不断地获得氧和养料，肿瘤细胞就要不断的分泌促血管形成因子，不少细胞因子与肿瘤血管形成密切相关，因此，抑制肿瘤血管形成可以导致肝癌细胞衰退。肿瘤血管生成中最主要的是血管内皮细胞生长因子(VEGF)。有试验表明，用脂质体法转然反义RNA对抗血管内皮生长因子，能够抑制裸鼠的种植性肝癌的生长［8］。6RNA干扰技术的应用　　RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术，也称为基因沉寂疗法，是利用双链RNA(doub

6、lestrandedRNA，dsRNA)诱发对宿主细胞特异性RNA转录的抑制，从抑制特异的基因表达的方法。利用RNAi技术可同时阻断多个癌基因的转录表达，从而有效抑制肿瘤的生长，达到治疗肿瘤的目的。体外RNA干扰技术的主要特点在于其能利用细胞本身的成分，使外源重组干扰片断能持续转录，同时能以一种类似酶促方式对目标mRNA进行切割，从而形成高效、稳定而持久的干扰效应。尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)是一种在肝癌细胞中高表达的蛋白，参与机体的多种生理和病理过程，其表达水平与患者的生存呈负相关。李华等［9］构建针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因siRNA

7、真核表达载体pLXSNEGFPU6siTERT，以hTERTsiRNA逆转录病毒为表达载体，感染HepG2细胞24、48、72h后，端粒酶活性分别下降了23.84%、58.03%和85.01%(P＜0.05)，感染后24h细胞凋亡29.05%，肝癌细胞生长受到抑制，并存在一定量效和时效关系。除了上述介绍的六种比较经典的基因治疗方法外，近年又出现了一些新的基因治疗方法。有专家设想利用超声/微气泡介导目的基因进入靶组织的靶胞内［1011］，可以达到靶向性、可控性转导基因治疗的目的，有望成为有实用价值的临床基因治疗技术。不同的基因治疗策略联合应用可相互协

8、同，常采用免疫基因和自杀基因的联合治疗［12］，在增强机体抗肿瘤免