《食品安全国家标准 油脂中没食子酸丙酯（pg）的测定》编制说明

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1、《食品安全国家标准油脂中没食子酸丙酯（PG）的测定》编制说明一、标准起草的基本情况（包括简要的起草过程、主要起草单位、起草人等）标准负责起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所主要起草人：杨大进、方从容、杨杰、。简要起草过程：2010年11月份底完成资料收集、整理工作，并公开征求多方对标准修订的意见，以确定研究方法与技术路线——增加分离度高的高相液相色谱法，并在参考国内外标准的基础上，对抗氧化剂（PG、TBHQ、BHA、BHT）现有的国内外标准方法进行优化。开展方法重现性、灵敏度、检出限、分离度、准确度、线性关系等技术内容的确定研究。2011年5月底完成检验方法的实验

2、摸索研究，起草出方法初稿。2011年6月底完成检验方法标准验证工作，公开征求各方对标准（草案）意见。2011年8月按照协议要求完成卫生标准（修）订工作，按期提交送审稿。二、标准的重要内容及主要修改情况1建议增加液相色谱法。GB/T5009.32-2003中的比色法采用的是AOAC（952.09）的方法，此方法是1969年在AOAC获得最后通过，在1994年AOAC又出台了同时检测PG、TBHQ、BHA、BHT的高效液相色谱方法（983.15）。比色法与高效液相色谱法相比，存在灵敏度不够高，操作繁琐等缺点，因此，建立灵敏度高、特异性好而又简便易行的仪器分析方法是有必要的。我编

3、制组在参考了国内外文献、AOAC方法、国标、行业标准中抗氧化剂（PG、TBHQ、BHA、BHT）检测方法的基础上，建立起精密度、准确性高的油脂中抗氧化剂（PG、TBHQ、BHA、BHT）的液相色谱方法。1.1方法的研制和实验条件的确定1.1.1方法的选择抗氧化剂（PG、TBHQ、BHA、BHT）的检测方法较多，国外标准方法有AOAC（983.15）、国内标准有GB/T21512-2008、GB/T23373-2009、NY/T1602-2008、SN/T1785-2006。那么这些方法的准确性、方法的可操作性需要进行考察。从检测的抗氧化剂种类，食品类别、所用提取溶剂、所用仪

4、器方法等方面对国内外标准进行比较、归纳总结，初步选择NY/T1602-2008为本标准的参考方法，以甲醇为提取溶剂，但根据其检测质控样的结果，对方法进行优化。1.1.2方法的优化针对BHA、BHT检测数值偏低的情况，拟采用增大甲醇提取量的方法来提高检测含量。在NY/T1602-2008法中，采用离心和过0.45µm的方式除去甲醇提取溶液中所含的油脂，但效果不好，为了延长色谱柱的寿命，在参考文献的基础上，采用将进行分析前的样品溶液，先放入冰箱冷冻1小时，放置至室温后，取上清液进行HPLC进行分析的方式，达到满意的效果。1.1.3流动相通过实验，最终采用甲醇，1%乙酸溶液，梯度

5、洗脱程序为本方法的流动相体系，色谱分离图如下：3图1PG、TBHQ、BHA、BHT标准分离色谱图1.1.4检测波长选择PG在275nm、TBHQ在292nm、BHA在290nm、BHT在280nm有最大吸收，为了使这四个抗氧化剂能同时检出，同时考虑到AOAC（983.15）和国内标准方法中抗氧化剂（PG、TBHQ、BHA、BHT）的检测波长都定为280nm。，因此最终确定本标准的检测波长为280nm。1.1.5色谱条件的确定色谱条件确定如下：色谱柱：Diamonsil（钻石）C18（4.6mm×250mm5μm）；柱温：25℃；流动相A：1%乙酸溶液；流动相B：甲醇，梯度洗

6、脱；流速：1.0mL/min；检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器；检测波长：280nm；进样量：20μL。在此色谱条件下，色谱峰峰形对称，分离度较好。标准谱图见图1及试样谱图见图2。图2某样品分离谱图1.2方法的科学性、可操作性的验证1.2.1标准溶液线性范围参考NY/T1602-2008标准检测方法中的标准使用溶液系列，结合实测样品的检测结果，使用以下标准使用溶液系列：2.0µg/mL，4.0µg/mL，10µg/mL，20µg/mL，40µg/mL，80µg/mLL，100µg/mL，实验结果显示线性良好，线性回归方程为：PGY=53800X-39300；r=0.99

7、99；TBHQY=15300X-13300；r=0.9999；BHAY=16700X+5220；r=0.9999；BHTY=9530X+3410；r=0.9999。1.2.2检验方法的定量限定量限：选取不含PG、TBHQ、BHA、BH的某花生油样品。准确量取40µg/mL的抗氧化剂（PG、TBHQ、BHA、BHT）混标溶液0.25mL，加入到5.00g样品中，平行做6份，按标准方法进行处理，定容体积为10.0mL，PG平加标回收率为93.5%;TBHQ平加标回收率为92.8%;BHA平加标回收率为85.5%;3BH