临床酶学检验技术

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1、临床酶学检验技术临床生物化学检验林孟戈第一节酶学基本知识●酶的本质---绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。●酶的特性---极高的催化效率、高度的特异性(specificity)以及催化作用的可调节性●酶的结构与功能单纯酶酶蛋白(apoenzyme)结合酶辅酶(coenzyme)辅因子(cofactor)辅基(prostheticgroup)●酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具有四级结构。●单体酶(monomericenzyme)---只由一条多肽链构成●寡聚酶(oligomer

2、icenzyme)---由多个相同或不同亚基以非共价键连接的酶●多酶体系(multienzymesystem)---由几种不同功能的酶彼此聚合而成的多酶复合物●酶的必需基团(essentialgroup)---与酶的活性密切相关的基团●酶的活性中心(activecenter)---组成具有能与底物结合并起催化反应的特定空间结构区域酶的命名、分类与编号●酶的命名---习惯命名法、系统命名法●酶的分类---可分为六大类氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂

3、解酶(或裂合酶)(lyases)、异构酶(isomerases)、合成酶(或连接酶)(synthetases或ligases)●酶的编号---用4个数字加以系统编号第一个数字表示酶的类别，第二个表示亚类，第三个表示亚-亚类，第四个表示酶的编号序数。习惯用名英文缩写EC编号系统名乳酸脱氢酶LD（LDH）1.1.1.27L乳酸：NAD+氧化还原酶单胺氧化酶MAO1.4.3.4单胺：氧化还原酶γ-谷氨酰转移酶γ-GT/GGT2.3.2.2γ-谷氨酰肽：氨基酸γ-谷氨酰转移酶门冬氨酸氨基转移酶AST2.6.1.1L-门冬氨酸：α-酮戊二酸

4、氨基转移酶（谷草转氨酶）(GOT)丙氨酸氨基转移酶ALT2.6.1.2L-丙氨酸：α-酮戊二酸氨基转移酶（谷丙转氨酶）(GPT)肌酸激酶CK2.7.3.2三磷酸腺苷：肌酸转磷酸酶碱性磷酸酶ALP(AKP)3.1.3.1正磷酸单酯磷酸水解酶临床酶学分析中常用酶的名称与编号三、酶促反应动力学（一）酶促反应方程（二）酶促反应进程（三）酶动力学参数1．反应速度2．米氏常数(1)初速度指在反应最初阶段底物的消耗量很小（一般在50%以内）时的反应速度(2)最大反应速度指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应速度(四)酶偶联反应ABCD酶学分析中

5、作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶Ei——指示酶Ea——辅助酶ExEiEa工具酶第二节血清酶变化的生理病理机制一、血清酶的来源与去路（一）血清酶的来源1．血浆固有酶2．非血浆固有酶①外分泌酶②细胞酶（二）血清酶的去路1．肾小球滤过从尿液中排出2．网状内皮系统清除3．血管内失活或灭活二、血清酶变化的生理病理机制（一）血清酶的生理差异1．性别2．年龄3．饮食4．运动5．妊娠（二）血清酶变化的病理机制1．酶合成异常2．细胞内酶的渗漏3．酶进入血液的方式4．其他血管内的抑制作用、清除速度(一)酶活性单位1．惯用单位2．国际单位--

6、-在特定的条件下，一分钟内使底物转变一微摩尔的酶量为一个国际单位。3．Katal单位---在规定条件下，每秒钟催化转化一摩尔底物的酶量。1katal＝60×106U第三节酶含量的表示方法一、酶活性浓度表示法（二）酶活性浓度指单位体积样品中的酶活性单位（三）正常上限升高倍数（ULN)是指用测得的酶活性结果除以参考范围上限二、酶蛋白质量浓度表示法测定酶蛋白质量浓度优点：①灵敏度高②特异性高③可测定无活性的酶④与酶活性测定一起，计算免疫比活性⑤在同工酶测定中更有价值第四节酶催化活性浓度测定的理论基础一、定时法二、连续监测法（三）连续监测

7、法的方法设计1．以人工合成色素原做底物的连续监测2．NAD(P)H的连续监测3．以Trinder反应做指示反应的连续监测4．特殊反应类型的连续监测第五节酶活性测定的影响因素与最适条件的确定一、方法因素的影响（一）正向反应与逆向反应（二）检测底物或检测产物（三）底物启动模式与样品启动模式二、测定条件的影响与最适条件的确定（一）底物种类和浓度（二）缓冲液种类、pH和离子强度（三）反应温度（四）辅助因子和激活剂（五）抑制剂（六）酶偶联法中的辅助酶和指示酶（七）延滞期与线性期的确定（八）样品与试剂比例三、其他因素对测定结果的影响（一）仪器

8、（二）校准物（三）实验参数（四）副反应第六节同工酶检测技术一、电泳法二、抑制法三、其他方法（一）热变性（二）亲和层析法免疫抑制法利用同工酶的一种亚基与相应的抗体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活