耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究论文

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1、耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究论文颜英俊刘华杨明清黄文方【摘要】目的分析我院2005年1～12月临床分离34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药相关基因存在状况，为临床抗感染治疗提供依据。方法应用PCR方法检测13种β内酰胺类抗菌药物耐药相关基因，分别为blaTEM、blaSHV、blaCARB、blaOXA10、blaPER、blaVEB、blaGES、blaDHA、blaIMP、blaVIM、blaGIM、blaSPM、oprD2；3种氨基糖苷类修饰酶基因，分别为：aac(6′

2、)I、aac(6′)II和ant(2")I；整合酶基因I(intI1)。结果耐药相关基因blaTEM、blaCARB、blaDHA、blaIMP、oprD2、aac(6′)I、aac(6′)II和ant(2")I、intI1阳性率分别为：5.9%、32.4%、14.7%、17.6%、97.1%、21.2%、33.3%、48.5%、3.0%；其余耐药基因均未检测到。结论携带多种耐药相关基因是耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药的重要原因之一，膜孔蛋白基因oprD2缺失不是本组铜绿假单胞

3、菌对亚胺培南耐药的主要原因。【关键词】铜绿假单胞菌；亚胺培南；β内酰胺酶类；氨基糖苷类修饰酶；整合酶I；耐药基因ABSTRACTObjectiveToinvestigate34strainsoftheantimicrobialresistancerelatedgenesofimipenemresistantPseudomonasaeruginosafrompatientsfromJantoDec2005.MethodAntimicrobialresistancerelatedgenesetho

4、d,includingblaTEM,blaSHV,blaCARB,blaOXA10,blaPER,blaVEB,blaGES,blaDHA,blaIMP,blaVIM,blaGIM,blaSPM,.freeledblaTEM,blaCARB,blaDHA,blaIMP,oprD2,acc(6′)I,aac(6′)II,ant(2")IandintI1ultipleresistantgenesrelatedtoimipenemaincauseofthePseudomonasaeruginosa

5、resistanttomanyantibotics,aincauseofbacteriaresistanttoimipenem.KEYJResearch公司)，BioRAD电泳仪，BioRAD凝胶成像系统，琼脂糖(Oxoid公司)，100bpDNALadderMarker(大连宝生物公司)，6×上样缓冲液(北京天为时代)。1.4模板DNA提取采用蛋白酶K消化法。1.5基因扩增应用PCR方法共检测17种耐药相关基因，引物序列见Tab.1。氨基糖苷类基因aac(6′)I、aac(6′)II、an

6、t(2")I和整合酶基因intI1热循环参数为：93℃预变性2min→93℃30s→55℃30s→72℃60s，共35个循环，最后72℃延伸2min。β内酰胺类耐药相关基因blaDHA和oprD2热循环参数为：93℃预变性3min→93℃30s→55℃30s→72℃60s，共35个循环，最后72℃延伸5min。其余基因热循环参数为：93℃预变性3min→93℃60s→55℃60s→72℃60s，共35个循环，最后72℃延伸5min。纯水为阴性对照。耐药基因检测试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供

7、。1.6结果判断取10μl扩增产物与2μl6×上样缓冲液混匀，点样于1.5%琼脂糖凝胶，100V电压电泳30min，出现目的条带即为检测基因阳性。2结果2.1IMPRPa的耐药特点IMPRPa除对阿米卡星100%敏感，对哌拉西林和哌拉西林/三唑巴坦较敏感，敏感率分别为48.39%和55.84%，对其余β内酰胺类、氟喹诺酮类、四环素、磺胺类抗生素耐药严重，结果见Tab.2。2.2耐药基因检测结果本组试验IMPRPa中，17种耐药相关基因检测结果和部分琼脂糖电泳结果分别见Tab.3和Fig.1～Fig

8、.5。3讨论近十多年来，由于广谱头孢菌素及碳青霉烯类药物的广泛应用，细菌耐药率有增长趋势，特别是多重耐药和耐IMP的Pa是临床抗感染治疗的难点之一，备受国内外学者关注。我院2005年1～12月分离的34株IMPRPa除对阿米卡星敏感(敏感率100%)外，哌拉西林和哌拉西林/三唑巴坦对Pa有较强的抗菌活性，敏感率分别为48.39%和54.84%，第三代、第四代头孢菌素及氨曲南、喹诺酮类等抗生素抗菌活性差，敏感率为3%～30%。有29.03%的IMPRPa对美罗培南敏感，