紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中pkc

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1、紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中PKC【关键词】卵巢癌,紫杉醇耐药,P　　ExpressionsofPKCαandPgpinTaxolresistantovariancancercelllineA2780/Taxol　　【Abstract】AIM:TodetecttheexpressionsofPglycoprotEin（Pgp）andprotEInkinaseCα(PKCα)isoforminTaxolresistantovariancancercelllineA2780/Taxol.METHODS:ImmunohistochemicalSPmethodanddou

2、blelabeledimmunofluorescenceinetheexpressionsofPgpandPKCαinA2780/TaxolandA2780.A)orstaurosporine(SP).RESULTS:ThereportantrolesintheresistanceofovariancancercellA2780totaxol.　　【Keys;Taxolresistance,Pglycoprotein;proteinkinaseC　　【摘要】目的：探讨PKCα与Pgp在紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞系A2780/Taxol中的表达.方法：免疫细胞化

3、学SP法及免疫荧光双标检测PKCα与Pgp在耐药细胞A2780/Taxol及其亲本细胞中的表达；A)和抑制剂十字孢碱(SP)作用后Pgp在两种细胞上的表达水平.结果：免疫细胞化学结果表明在A2780/Taxol中，Pgp与PKC表达均呈阳性，而在亲本细胞中，Pgp不表达，PKC呈阳性表达.在A2780/Taxol中PKCα与Pgp有共表达.SP及PMA作用后，A2780/Taxol细胞Pgp表达无明显差别.结论：卵巢癌对紫杉醇耐药的产生与PKCα和Pgp有关.　　【关键词】卵巢癌，紫杉醇耐药，P糖蛋白，蛋白激酶C　　0引言　　紫杉醇在卵巢癌化疗中占有重要地位，

4、而耐药是影响疗效的重要因素.多药耐药基因(mdr1)编码的P糖蛋白(Pglycoprotein,Pgp)的过表达是紫杉醇耐药机制之一，而Pgp是由蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)磷酸化而发挥功能的，在PKC众多同功酶中又以α同功酶(PKCα)与多药耐药(multidrugresistence,MDR)关系最为密切.因此我们培养紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞，研究其Pgp及PKCα的表达，为逆转耐药提供依据.　　1材料和方法　　1.1材料卵巢癌细胞系A2780及其紫杉醇耐药孕系(A2780/Taxol)由王泽华教授惠赠，培养于含有100mL/L小牛

5、血清的DMEM完全培养基，置于37℃，50mL/LCO2，相对湿度90%的培养箱中培养；试剂DMEM购于Gibco公司，鼠抗人MDR1mAb及兔抗人PKCαpAb购于Boster公司，SP免疫组化试剂盒，罗丹明标记的羊抗兔IgG及FITC标记的羊抗鼠IgG购于北京中山金桥生物技术公司，十字孢碱(SP)和佛波脂(PMA)购于Sigma公司.　　1.2方法　　1.2.1细胞爬片A2780和A2780/Taxol细胞按2×106个/L浓度接种于装有防脱处理的盖玻片的6孔板中培养24h，取出爬片，10mol/LPBS冲洗2次，950mL/L乙醇固定10min，中性树胶

6、黏于载玻片上.　　1.2.2免疫组化SP染色取上述细胞爬片，封闭后分别滴加鼠抗人MDR1mAb(1∶50)和兔抗人PKCαpAb(1∶100),DAB显色，苏木素复染，脱水透明，中性树胶封片.　　1.2.3免疫荧光双染细胞爬片同上，滴加MDR1mAb(1∶50)和兔抗人PKCαpAb(1∶100)，4℃冰箱孵育过夜，滴加FITC标记的羊抗鼠IgG和罗丹明标记的羊抗兔IgG，PBS振洗，甘油封片.同时设PBS代替一抗的阴性对照.　　1.2.4A组：培养A2780/Taxol细胞，PMA浓度200nmol/L与细胞共同孵育40min后收集细胞；4组A2780/Ta

7、xol细胞+SP组：培养A2780/Taxol细胞，SP浓度100nmol/L与细胞共同孵育2h后收集细胞.按　　2结果　　2.1Pgp在A2780/Taxol细胞中的表达免疫细胞化学SP染色结果表明Pgp在A2780/Taxol细胞中表达为阳性（图1），在A2780细胞中不表达；PKCα在两种细胞中均表达，在A2780/Taxol细胞中表达呈强阳性(图2)；免疫荧光双标结果示Pgp与PKCα在A2780/Taxol细胞中有共表达现象，在A2780细胞中仅有红色荧光，即仅有PKCα的表达（图3）.　　图1－图3　略　　2.2SP和PMA作用后Pgp在A2780

8、/Taxol细胞中的表达A2780/T