紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中pkc论文

《紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中pkc论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中PKC论文【关键词】卵巢癌,紫杉醇耐药,PExpressionsofPKCαandPgpinTaxolresistantovariancancercelllineA2780/Taxol【Abstract】AIM:TodetecttheexpressionsofPglycoprotein（Pgp）andproteinkinaseCα(PKCα)isoforminTaxolresistantovariancancercelllineA2780/Taxol.METHODS:Immun

2、ohistochemicalSPmethodanddoublelabeledimmunofluorescenceinetheexpressionsofPgpandPKCαinA2780/TaxolandA2780.A)orstaurosporine(SP).RESULTS:ThereportantrolesintheresistanceofovariancancercellA2780totaxol.【Keys;Taxolresistance,Pglycoprotein;proteinkinaseC【摘

3、要】目的：探讨PKCα与Pgp在紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞系A2780/Taxol中的表达.方法：免疫细胞化学SP法及免疫荧光双标检测PKCα与Pgp在耐药细胞A2780/Taxol及其亲本细胞中的表达；A)和抑制剂十字孢碱(SP)作用后Pgp在两种细胞上的表达水平.结果：免疫细胞化学结果表明在A2780/Taxol中，Pgp与PKC表达均呈阳性，而在亲本细胞中，Pgp不表达，PKC呈阳性表达.在A2780/Taxol中PKCα与Pgp有共表达.SP及PMA作用后，A2780/Taxol细胞Pgp表达

4、无明显差别.结论：卵巢癌对紫杉醇耐药的产生与PKCα和Pgp有关.【关键词】卵巢癌，紫杉醇耐药，P糖蛋白.freeldr1)编码的P糖蛋白(Pglycoprotein,Pgp)的过表达是紫杉醇耐药机制之一，而Pgp是由蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)磷酸化而发挥功能的，在PKC众多同功酶中又以α同功酶(PKCα)与多药耐药(multidrugresistence,MDR)关系最为密切.因此我们培养紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞，研究其Pgp及PKCα的表达，为逆转耐药提供依据.1材料和方

5、法1.1材料卵巢癌细胞系A2780及其紫杉醇耐药孕系(A2780/Taxol)由王泽华教授惠赠，培养于含有100mL/L小牛血清的DMEM完全培养基，置于37℃，50mL/LCO2，相对湿度90%的培养箱中培养；试剂DMEM购于Gibco公司，鼠抗人MDR1mAb及兔抗人PKCαpAb购于Boster公司，SP免疫组化试剂盒，罗丹明标记的羊抗兔IgG及FITC标记的羊抗鼠IgG购于北京中山金桥生物技术公司，十字孢碱(SP)和佛波脂(PMA)购于Sigma公司.1.2方法1.2.1细胞爬片A2780和A

6、2780/Taxol细胞按2×106个/L浓度接种于装有防脱处理的盖玻片的6孔板中培养24h，取出爬片，10mol/LPBS冲洗2次，950mL/L乙醇固定10min，中性树胶黏于载玻片上.1.2.2免疫组化SP染色取上述细胞爬片，封闭后分别滴加鼠抗人MDR1mAb(1∶50)和兔抗人PKCαpAb(1∶100),DAB显色，苏木素复染，脱水透明，中性树胶封片.1.2.3免疫荧光双染细胞爬片同上，滴加MDR1mAb(1∶50)和兔抗人PKCαpAb(1∶100)，4℃冰箱孵育过夜，滴加FITC标记的羊

7、抗鼠IgG和罗丹明标记的羊抗兔IgG，PBS振洗，甘油封片.同时设PBS代替一抗的阴性对照.1.2.4A组：培养A2780/Taxol细胞，PMA浓度200nmol/L与细胞共同孵育40min后收集细胞；4组A2780/Taxol细胞+SP组：培养A2780/Taxol细胞，SP浓度100nmol/L与细胞共同孵育2h后收集细胞.按文献［1］提取总蛋白，Lool/LBSA的TBST4℃冰箱封闭过夜，加入兔抗人PgppAb（1∶500），室温轻摇60min，加入羊抗兔APIgG,显色液避光显色2min，

8、同时，以βactin作内参.A作用后Pgp在A2780/Taxol细胞中的表达A2780/Taxol组在Mr为170×103位置有明显条带.A,A2780/Taxol+SP组Pgp与βactin的灰度扫描值分别是28.93%，29.34%,28.57%，差异无统计学意义(P0.05)，说明3,4组，与2组相比Pgp表达量并无明显增加或减少（图4）.图4略3讨论紫杉醇耐药的机制很多，目前比较确定的有Pgp表达的升高，微管β亚基的改变，微管α亚基的改变及凋亡