食管鳞癌组织芯片中mta1蛋白表达的免疫组织化学研究论文

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1、食管鳞癌组织芯片中MTA1蛋白表达的免疫组织化学研究论文钱海利，李云峰，于静，宋崇文，吕宁，张雪燕，梁萧，付明.freelodelinganddeacetylationplex，NuRD)的成分，通过影响染色质的状态来调控基因转录2。Toh等研究还发现，MTA1在食管癌中的表达与其H4组蛋白的脱乙酰基活性相关3。经典的抑癌基因如p53、p21和Rb基因都受组蛋白乙酰化的调控4。高表达MTA1mRNA的肿瘤细胞侵袭与淋巴结转移率明显升高。有鉴于此，我们对食管癌中的MTA1蛋白表达进行研究，确定MTA1基因在食管鳞癌中表达情况，以及该表达水平与肿瘤临床行为

2、的相关性，为进一步探讨其在食管癌转移过程中的可能分子机制打下基础。1材料与方法1.1抗体羊抗人MTA1多克隆抗体（SantaCruz，sc9446）HRP标记羊抗鼠IgG（北京中山生物公司，ZB2305）1.2食管癌组织芯片临床病理资料食管癌组织芯片由中国医学科学院肿瘤医院病理科吕宁教授提供。芯片共包含72例食管鳞癌患者的组织样本，就诊时间为2002～2003年。其中癌旁正常鳞状上皮组织67例，重度不典型增生组织42例，侵袭性癌组织70例，淋巴结转移癌组织20例。1.3免疫组织化学染色步骤组织标本石腊包埋切片，常规脱腊至水；0.01M枸橼酸盐缓冲液

3、（pH6.0）进行抗原修复；1∶200稀释一抗，37℃作用1h；生物素标记的二抗IgG，37℃孵育30min；加HRP（辣根酶过氧化物酶）标记的链霉卵白素37℃作用30min；冲洗后DAB显色复染封片。1.4免疫组织化学评分1.4.1MTA1各种组织中的核染色评分标准如文献5所述。最终评分范围为0～12分。我们将最终评分8～12定义为强表达，4～8为中等表达，0～4为弱表达。1.4.2MTA1蛋白的细胞浆染色按以下标准来进行：（a）阳性，组织中细胞浆着色的细胞数≥20%；（b）阴性，组织中上皮细胞或肿瘤细胞的细胞浆着色数20%。1.5统计学处理实验中的

4、数据分析用SPSS11.0进行分析。食管癌不同发展阶段组织之间以及不同侵袭程度组织之间MTA1表达差异用方差分析进行显著性检验。细胞浆与细胞核MTA1阳性率差异用双侧卡方检验进行显著性分析。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1不同进展阶段食管鳞状细胞癌的MTA1的表达水平组织芯片染色质量满意，见图1。在正常食管鳞状上皮细胞，MTA1蛋白在细胞核中低表达，而在不典型增生细胞中，MTA1表达水平增高。在侵袭性癌细胞与转移癌细胞中，MTA1阳性细胞数量及染色强度均明显增高。在研究的样本中，从正常食管鳞状上皮到侵袭癌细胞，MTA1核表达水平随着肿瘤发生阶

5、段的进展而升高，见图2a～c。72例正常食管鳞状上皮、不典型增生、侵袭癌和淋巴结转移癌的MTA1表达评分分别为2.93±1.81,6.32±2.72,8.28±2.43和6.95±2.17。不典型增生细胞、侵袭癌细胞与转移癌细胞细胞中MTA1表达水平均高于食管正常鳞状上皮细胞(P0.01)。侵袭癌细胞中MTA1表达水平高于不典型增生细胞，且统计学意义显著(P0.01)。转移癌细胞中MTA1核表达水平低于侵袭癌细胞，但统计学意义不显著，见图2c,d。2.2从正常食管鳞状上皮细胞至侵袭癌的进程中，MTA1弱表达的样本比例逐渐降低，而MTA1强表达的样本比例

6、逐渐升高。但在转移灶肿瘤细胞中的表达主要集中于中等表达水平，见表1，图3。数据分析中发现MTA1表达水平在不同临床阶段、病理类型的组织中表达差异性不显著，需进一步扩大样本量来进行分析验证。2.4MTA1在食管鳞癌中的异位表达我们注意到食管鳞状细胞癌MTA1蛋白出现了不同程度的细胞浆表达，甚至胞膜表达，见图2e、2f。33%无淋巴结转移的食管鳞癌标本显示了MA1蛋白的胞浆表达(17/50)，而45%的转移癌细胞出现MTA1胞浆表达(13/20)(0.013讨论利用病理存档的标本进行免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织中相关基因蛋白产物能回顾性研究现有的病例资

7、料，充分利用病例资源，是肿瘤组织学研究中不可替代的手段。组织芯片技术可以将数十个甚至上千个不同个体的临床组织标本按预先设计的顺序排列在一张玻片进行分析研究，可以按照不同的需求设计组织排列，具有高通量、可比性强、节约大量成本（时间、财力、人力）的优点，而且在同样的条件下进行操作及染色等过程，提高了样本之间蛋白表达水平的可比性，减小了操作的系统误差6,7。利用组织芯片能同时对几百甚至上千种正常或疾病以及疾病发展不同阶段的自然病理生理状态下的组织样本，进行某一个或多个特定的基因或与其相关的表达产物的研究8。组织芯片技术可以广泛地与DNA、RNA、蛋白质、抗原

8、、抗体、细胞、传统的病理学技术、免疫组织化学、原位杂交、原位PCR、原位RTPCR等技术相结