pcna与慢性粒细胞白血病急变关系的研究论文

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1、PCNA与慢性粒细胞白血病急变关系的研究论文张冬清曾宇然程源山王佩芬【摘要】目的：探讨增殖细胞核抗原(PA)与慢性粒细胞白血病(CML)急变之间的关系。方法：采用流式细胞仪技术检测CML患者在慢性期和急变期以及治疗后外周血中的PA表达水平。结果：CML慢性期与正常对照组的PA表达差异有统计学意义(P0.01)，在急变期PA表达水平显著高于慢性期(P0.01)，而在治疗达完全缓解后PA表达水平显著降低。结论：PA表达增高可能是引起CML急变的一个重要原因。【关键词】PA慢性粒细胞白血病急变关系慢性粒细胞白血病(C

2、hronicgranulocyticleukemia，CML)是起源于多能造血干细胞的肿瘤性增生疾病，其自然病程可分为慢性期、加速期和急变期。急变期是慢性粒细胞白血病的晚期，治疗效果差，其发病机制目前是国内外研究的热点。增殖细胞核抗原(Proliferatingcellnuclearantigen，PA)是促进细胞从G1期进入S期的重要细胞周期调控蛋白.freelanCoulter公司产品;低温高速离心机(德国Heraeus公司);EpicxXL流式细胞仪(美国BeckmanCoulter公司)。1.3实验方法

3、1.3.1标本的采集和处理抽取静脉血2ml，用EDTAK2抗凝，充分混匀，采用密度梯度离心得到单个核细胞后用PBS液洗2遍，调整细胞数至1×106·ml-1。1.3.2PA染色取A、B两支试管，各加入细胞悬液10μl，其中A管加入FITC荧光标记的的PA单抗10μl，B管加入FITCIgG2作为同型阴性对照;将A、B管室温下避光15min;取出后用PBS液洗两次，200目尼龙膜过滤后上机检测。1.3.3流式细胞仪分析上机检测前采用标准荧光微球Flo处被氩离子激光激发，FITC的绿荧光通过525nm滤光片收集

4、。每份标本均检测10000个细胞。1.4统计学处理应用Excel统计软件处理实验数据，所有数据以x±s表示，用t检验进行统计分析，以P0.05为差别有统计学意义，P0.01为差别有高度统计学意义。2结果2.1PA在CML慢性期和急变期中的表达15例CML慢性期患者PA的表达为(23.53±6.47)%，与正常对照组比较差异有显著性(P0.01)，10例急变期患者PA表达为(56.45±12.32)%，明显高于慢性期。结果见表1。表1PA在CML和正常对照组中的表达2.2PA在CML急变期化疗前后的比较5例CML

5、急变期患者，采用标准化疗方案进行化疗，获得完全缓解时PA的表达水平发生了明显的变化，由治疗前的(53.46±12.49)%降为(11.48±5.36)%，两者比较差异有显著性(P0.01)，而完全缓解时与正常对照组比较差异无显著性(P0.05)。3讨论CML是一种造血干细胞的恶性克隆性增殖性疾病，由bcr/abl融合基因激活多个信号传导途径(如Ras、P13K、MAPK、JAK/STAT)在CML的发病机制中起关键作用，然而目前这些信号分子的确切功能以及在CML急变中的具体机制尚未肯定1。目前，多数学者认为CM

6、L急变是涉及多基因、多途径调控异常的复杂过程2-4：在分子水平，涉及癌基因、抑癌基因、细胞周期蛋白以及DNA合成、修复和重组蛋白等;在细胞水平，涉及恶性白血病细胞的凋亡受阻、分化障碍以及耐药发生等。PA为核内蛋白质，相对分子量为36000，表达于细胞周期的Gl期，在S期达高峰，在G0期表达很少，是促进细胞从G1期进入S期的关键因素，并通过和多种细胞周期调控蛋白相互作用从而在细胞周期调控中发挥重要作用5;PA也是DNA多聚酶辅助蛋白，在DNA复制、修复、重组中发生作用，近年已成为检测细胞增殖活性的新型指标6。Mi

7、chaela等采用RTPCR技术发现：CML患者在发病初期外周血中PA基因表达明显增强，提示PA表达增高与CML的发病存在一定的关系7。本研究采用流式细胞仪技术进一步证实CML患者在慢性期外周血中PA蛋白表达水平已开始增高，与正常对照组比较差异有显著性，并且在急变期进一步明显增强;另外，我们观察了CML急变患者治疗前后PA表达水平的变化，发现经治疗达完全缓解时PA表达水平明显降低，接近正常水平。以上研究说明PA表达增高可能是引起CML急变的一个重要原因。【