彝药野坝子花总黄酮的提取及对活性氧自由基的清除作用

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1、彝药野坝子花总黄酮的提取及对活性氧自由基的清除作用作者：文美琼，李璐，杨申明，杨永梅，杨玉良【摘要】目的研究野坝子花中总黄酮的提取及其对活性氧自由基的清除作用。方法采用醇提酸沉法提取野坝子花中总黄酮，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定黄酮含量，用总黄酮对活性氧自由基清除作用进行实验。结果样品中总黄酮含量为C=0.2352mg/ml，对·OH和O-2·的清除率分别可达30.85%和44.52%。结论野坝子花中黄酮类物质对·OH和O-2·有较好的清除能力。【关键词】野坝子花；总黄酮；羟自由

2、基；超氧阴离子自由基　黄酮类化合物(flavonoids)是一类重要的广泛存在于自然界的天然有机化合物，是目前备受关注的天然产物之一，在植物体中通常以游离或与糖形成苷的形式存在。黄酮类化合物作为一种功能成分，具有许多有益的生物学活性［1,2］，其中重要的生物学活性之一是减少自由基形成、消除自由基的抗氧化活性。　　野坝子Elsholtziarugulosa是唇形科香薷属植物，是云南楚雄彝族人民的常用植物药之一，它是一种药食同源的植物，广泛分布于云南各地。野坝子是汉药名，在各地叫法不一，又名野坝蒿、野巴

3、子、野拔子、野香苏、野苏草、夸巴脂、小铁苏、扫把茶、草拔子、草芝麻蒿、皱叶香薷等，其彝药名为阿能抛，始载于《中国彝药学》，全草均可入药，在《全国中药汇编》中记载了其药效。　　现今，有学者对野坝子进行了红外光谱分析［3］、化学成分分析［4］等研究工作，而对其中黄酮类化合物抗氧化性的研究尚未见报道。本文对野坝子花中总黄酮进行提取、鉴定，并研究其总黄酮对羟自由基（·OH）及超氧阴离子自由基（O-2·）的清除作用。　　1材料与仪器　　1.1材料野坝子花采自云南楚雄市西山公园，经楚雄师范学院化学与生命科学系徐

4、成东博士鉴定为唇形科香薷属植物野坝子花。　　1.2试剂芦丁（日本和光纯药工业株式会社）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、硫酸亚铁、水杨酸、双氧水、盐酸、锌粉均为国产分析纯；水为实验室自制超纯水。　　1.3仪器754型紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂制造），HH-S2型恒温水浴锅（金坛市大地自动化仪器），CP214C电子天平（奥豪斯仪器有限公司制造），SHZ-IIIA型循环水式真空泵（巩义市英峪予化仪器厂）等。　　2方法与结果　　2.1总黄酮成分提取准确称取一定质量的野坝子花干粉，用50%

5、的乙醇预浸18h，于80℃回流提取3h（共2次），提取液浓缩后，加盐酸调节pH值至3～4，使黄酮类化合物沉淀，沉淀以50%的乙醇溶解并定容于250ml容量瓶得样品液。　　2.2总黄酮成分的鉴别［5,6］取样品液1ml于试管中，分别加入以下试剂，结果见表1。表1黄酮类化合物的定性鉴定（略）　　由表1可以说明，野坝子花的提取物是黄酮类化合物。　　2.3总黄酮含量测定　　2.3.1测定方法依据以芦丁为对照品测定野坝子花中黄酮类化合物的含量，加入铝离子试剂，在碱性条件下使黄酮类化合物与铝盐形成络合物，在可见

6、光区能获得稳定的特征吸收峰。　　2.3.2测定波长选择准确吸取1.00ml的样品液于25ml比色管中，加5%亚硝酸钠溶液1.00ml；10%硝酸铝溶液1.00ml；4%氢氧化钠溶液10.00ml，再加50%乙醇至刻度。以试剂空白作参比，在400～……700nm之间测定络合物吸光度,络合物在510nm处有最大吸收，故测定时选用此波长。　　2.3.3标准曲线的绘制准确吸取0.200mg/ml的芦丁对照品溶液0.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00ml分别置于25ml比色管中，各加5%

7、亚硝酸钠溶液1.00ml，混匀，放置6min；加10%硝酸铝溶液1.00ml，混匀，放置6min；加4%氢氧化钠溶液10.00ml，再加50%乙醇至刻度，摇匀，放置10min。在510nm波长处以试剂空白为参比测定吸光度，绘制标准曲线，得回归方程为A=0.01135C-0.02648，r=0.9995。所得标准曲线见图1。　　2.3.4提取液总黄酮含量的测定精密量取样品溶液1.00ml，置于25ml比色管中，按标准曲线的绘制项中操作方法显色后，测定出试液吸光度，根据回归方程，计算出原样品溶液总黄酮的

8、含量为C=0.2352mg/ml。　　2.4总黄酮提取物对羟自由基（·OH）清除作用［7］参照Fenton反应的方法建立反应体系模型。利用H2O2与Fe2+混合后产生存活时间短，具有很高反应活性的·OH这一性质，在反应体系中加入水杨酸后，就能有效地捕捉·OH，并产生有色产物，该产物在510nm处有强吸收。若加入具有清除·OH功能的黄酮类化合物时，黄酮类化合物便会与水杨酸竞争·OH,从而使有色产物生成量减少。采用固定反应时间法，在510nm处测量含被测物反应液的吸光度，