宁心红杞胶囊高效液相色谱指纹图谱研究论文

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1、宁心红杞胶囊高效液相色谱指纹图谱研究论文汪光林，王坚，吕晔，孟长虹，陆益红【摘要】目的建立宁心红杞胶囊HPLC指纹图谱分析方法。方法采用kromasilC18色谱柱,乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长205nm。结果对10个批号的样品进行了测定，标出21个共有峰。结论该法快速、准确、可靠.freelethodoffingerprintanalysisofMenoprogenbyHPLC.MethodsKromasilC18columnixturesof0.1%phosphoricacidandacetonit

2、rileasmobilephaseinagradientelution.Theflol/min，thecolumntemperature.ResultsTendifferentsamplesinedand21monpeaksofchromatogramethodisquick,accurate,reliableandcanbeusedforqualitycontrolofmenopenry.Keyp，G1379ADegasser，G1313AAutosampler，G1314AVariableSation工作站(美国Agilent公司)；KQ-2

3、50DE型医用数控超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)；Sartorius电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。金丝桃苷(批号111521-200303，中国药品生物制品检定所)；宁心红杞胶囊样品由南京美福天然药物科技有限公司提供。甲醇、乙腈(韩国SKchemicals公司生产)为色谱纯；磷酸（南京化学试剂有限公司生产）为分析纯；水为自制重蒸水。2方法与结果2.1色谱条件KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱，Phenomenexfusion-RpC18(4.0mm×3.0mm)保护柱，柱温30℃，流速1ml/m

4、in；检测波长205nm，乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱，洗脱程序(见表1)。在选定条件下，金丝桃苷和相邻组分色谱峰分离度大于1.5，按金丝桃苷峰计算，理论塔板数在4500以上，运行150min，色谱图显示所有组分均在135min内洗脱出柱。表1流动相梯度变化程序（略）2.2检测波长的选择本实验采用二极管阵列紫外检测器,.freel色谱图出峰数目最多，峰形最好，基线平，各色谱峰相互之间分离度较好，故检测波长定为205nm。2.3溶液的制备2.3.1供试品溶液的制备精密称取宁心红杞胶囊内容物1g，置10ml容量瓶中，加甲醇适量，浸泡2h，超声处理30m

5、in，甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，进样前取续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤。2.3.2对照物溶液的制备精密称取金丝桃苷对照品10mg置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度摇匀得0.1mg/ml的溶液作为对照物溶液，进样前0.45μm微孔滤膜过滤。2.4指纹图谱测定的方法学考察2.4.1空白及对照实验吸取甲醇10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。在选定条件下，空白溶剂(甲醇)对测定无干扰，见图1。吸取参照物溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2。2.4.2精密度实验按“供试品溶液的制备”方法制备宁心红杞胶囊供试品溶液，连续进

6、样5次，记录HPLC色谱图，结果各共有峰相对峰面积的RSD在0.31%～1.42%，相对保留时间的RSD在0.06%～0.16%，表明仪器精密度良好。2.4.3稳定性实验按“供试品溶液的制备”方法制备宁心红杞胶囊供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24h进样分析，记录HPLC色谱图，结果各共有峰相对峰面积的RSD在0.43%～1.87%，相对保留时间的RSD在0.13%～0.18%，表明样品在24h内稳定性良好。2.4.4重复性实验取同一批样品按“供试品溶液的制备”方法平行操作，制备5份宁心红杞胶囊供试品溶液，记录HPLC色谱图，结果各共有峰

7、相对峰面积的RSD在0.29%～1.68%，相对保留时间的RSD在0.08%～0.15%，表明方法重复性良好。2.5宁心红杞胶囊指纹图谱的测定及技术参数2.5.1指纹图谱的测定吸取10个不同批号的宁心红杞胶囊供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下条件进行HPLC分析，记录135min的色谱图。比较10批样品色谱图，发现21个峰是各批样品共有的，因此确定这21个峰为共有指纹峰，见图3。2.5.2对照物的选择在HPLC图谱中选择峰面积较大、出峰时间适中且稳定的色谱峰作为对照峰，其中保留时间为36.5min的色谱峰(7号峰)是HPL

8、C图谱中峰面积较大、出峰时间适中并且很稳定的一个峰，经标准品对照认定为金丝桃苷，故选择金丝桃苷作为对照物。表210批宁心红杞胶囊的HPL