何首乌对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究

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1、何首乌对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究【关键词】何首乌；,,培养心肌细胞；,,缺氧；,,超氧化物岐化酶；,,丙二醛；,,组织化学　　摘要：目的观察何首乌对培养心肌细胞缺氧性损伤的影响。方法将DA）含量明显降低（P＜0.01）。结论何首乌对缺氧心肌细胞具有良好的保护作用。　　关键词：何首乌；培养心肌细胞；缺氧；超氧化物岐化酶；丙二醛；组织化学　　ExperimentalStudyontheProtectiveEffectsofFleecefloechanismofFleeceflonificationcardiacmu

2、sclecells.MethodsThecardiacmusclecellsofodeltoinvestigatetheprotectiveeffectsofFleeceflonificationcardiacmusclecellsbymeansofbiochemicaltesting,histochemistryandsoon.ResultsInthenormalgroup,PASreactionofcardiacmusclecellsandtheactivityofSDHincreasedalgroup,theact

3、ivityofSODodelcontrolgroupandthecontentofMDAincreasedsignificantly(P<0.01).ConclusionTheresultsprovethatFleeceflousclecell；Anoxia；SOD；MDA；Histochemistry　　何首乌又称首乌、赤首乌，是蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunb.的干燥块根，其化学成分主要有卵磷脂、羟基蒽醌类化合物（主要为大黄素、大黄酚、大黄酸等葡萄糖苷）、二苯乙烯苷类及微量元素钙

4、、铁、锌、锰、铜等［1］。何首乌具有补肝、益肾、养血、祛风的作用，主治肝肾阴亏、发须早白、血虚头晕、腰膝软弱、筋骨酸痛、遗精崩带、久疟、久痢、慢性肝炎、痛肿等病症［2］。何首乌对在体缺血再灌注心肌细胞具有保护作用［3］，但其对体外缺氧培养心肌细胞等方面的研究，国内外尚未见报道。本实验利用培养心肌细胞模拟心肌缺血再灌注损伤模型，应用生化检测及组织化学等研究方法，探讨了何首乌对培养心肌细胞缺氧性损伤的保护作用及其作用机理，为何首乌的临床应用提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1动物IMedium1640培养基为GIBCO公

5、司产品；胰蛋白酶为DIFCO公司产品；新生灭活小牛血清为北京华美生物工程公司产品；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒和丙二醛（MDA）试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。　　1.4仪器超净工作台为上海净化设备厂产品；USA二氧化碳培养箱；日本OLYMPUS倒置相差显微镜；德国ZK15型超低温离心机；芬兰MK3型酶标仪；CSS200型超声波粉碎机为山东济宁无线电仪器厂产品。　　1.5方法　　1.5.1心肌细胞的原代单层培养心肌细胞的培养采用姜玉顺等［4］建立的原代单层培养方法。　　1.5.2培养心肌细胞"缺氧"损伤模型的制备将

6、生长良好的培养心肌细胞的培养基倒掉，以预先饱和纯氮气（99.99%）40min的N2饱和缺氧培养基冲洗2次，取N2饱和缺氧培养基3ml加入培养瓶中，同时向瓶内充氮气10s以置换瓶内空气，置于37℃二氧化碳培养箱中，12h后备用。　　1.5.3分组及处理取生长良好的培养瓶36瓶随机分为4组：正常组、模型组、对照组及实验组。正常组更换正常培养基培养；模型组更换N2饱和缺氧培养基培养；对照组为N2饱和缺氧培养基加0.5mg/ml人参皂苷共培养；实验组为N2饱和缺氧培养基加5mg/ml何首乌提取物共培养。将各组均置于37℃二氧化

7、碳培养箱内培养12h。　　1.5.4生化检测实验各组各取6瓶测定SOD活性和MDA含量。采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，采用TBA法测定MDA含量，SOD活性和MDA含量的测定严格按照试剂盒操作程序进行。　　1.5.5组织化学观察实验各组各取3瓶做组织化学染色。取出各组培养瓶内的生长细胞盖玻片，进行PAS反应显示糖原，用酶组织化学方法显示SDH及ACP。经上述染色后用OLYMPUS万能显微镜观察并拍片分析。　　1.5.6数据处理各组数据均采用SPSS11.0统计软件进行方差分析。　　2结果　　2.1生化检测结果　　2.

8、1.1何首乌对缺氧培养心肌细胞SOD活性的影响实验组及对照组心肌细胞SOD活性明显高于模型组（P＜0.01），说明何首乌能有效提高心肌细胞SOD活性，以清除超氧阴离子自由基保护培养心肌细胞免受缺氧损伤。结果见表1。　　表1何首乌对缺氧培养心肌细胞SOD活性的影响（略）　　*与模型组相比较,P＜0.01　　2.1.2何