何首乌对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究.doc

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1、何首乌对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究【关键词】何首乌；，，培养心肌细胞；，，缺氧；，，超氧化物岐化酶；，，丙二醛；，，组织化学摘要：目的观察何首乌对培养心肌细胞缺氧性损伤的影响。方法将Wistar系大鼠乳鼠心肌细胞原代单层培养5d，建立“缺氧”损伤模型，通过生化检测及组织化学等方法，研究何首乌对缺氧培养心肌细胞的保护作用。结果实验组及对照组心肌细胞PAS反应和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性明显增强而酸性磷酸酶活性减弱；实验组及对照组超氧化物歧化酶活性较模型对照组增强而丙二醛含量明显降低。结论何首乌对缺氧心肌细胞具有良好的保护作用。关键词：何首乌；培养心肌细胞

2、；缺氧；超氧化物岐化酶；丙二醛；组织化学ExperimentalStudyontheProtectiveEffectsofFleeceflowerRoottotheAnoxicCulturedCardiacMuscleCellsAbstract:ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectsandmechanismofFleeceflowerRoottotheculturedanoxicdamnificationcardiacmusclecells.MethodsThecardiacmusclecellsofwistars

3、ucklingratswereculturedfor5days,andwasananoxicsetupinjuredmodeltoinvestigatetheprotectiveeffectsofFleeceflowerRootontheculturedanoxicdamnificationcardiacmusclecellsbymeansofbiochemicaltesting,histochemistryandsothenormalgroup,PASreactionofcardiacmusclecellsandtheactivityofSDHincreas

4、edwhiletheactivityofACPdecreased；Comparedtothenormalgroup,theactivityofSODwasstronginthecellsofthemodelcontrolgroupandthecontentofMDAincreasedsignificantly(PKeywords:Fleecef1owerRoot；Culturedcardiacmusclecell；Anoxia；SOD；MDA；Histochemistry何首乌又称首乌、赤首乌，是蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunb

5、.的干燥块根，其化学成分主要有卵磷脂、羟基蒽醌类化合物、二苯乙烯苷类及微量元素钙、铁、锌、锰、铜等［1］。何首乌具有补肝、益肾、养血、祛风的作用，主治肝肾阴亏、发须早白、血虚头晕、腰膝软弱、筋骨酸痛、遗精崩带、久疟、久痢、慢性肝炎、痛肿等病症［2］。何首乌对在体缺血再灌注心肌细胞具有保护作用［3］，但其对体外缺氧培养心肌细胞等方面的研究，国内外尚未见报道。本实验利用培养心肌细胞模拟心肌缺血再灌注损伤模型，应用生化检测及组织化学等研究方法，探讨了何首乌对培养心肌细胞缺氧性损伤的保护作用及其作用机理，为何首乌的临床应用提供理论依据。1材料与方法动物Wistar系大

6、鼠乳鼠，3〜5d龄，50只，由延边大学医学院实验动物科提供。药品取何首乌块根100(^，加蒸馏水20001111浸泡比。100°C煮沸2h，过滤。再加蒸馏水2000ml煮沸1h，过滤。将两次过滤液在80°C水浴下浓缩成浸膏，在70°C温箱中烘干、粉碎，备用。试剂人参总皂苷由延边大学天然植物制品研究所提供；RPMIMediuml640培养基为GIBC0公司产品；胰蛋白酶为DIFC0公司产品；新生灭活小牛血清为北京华美生物工程公司产品；超氧化物歧化酶试剂盒和丙二醛试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。仪器超净工作台为上海净化设备厂产品；USA二氧化碳培养箱；日本OL

7、YMPUS倒置相差显微镜；德国ZK15型超低温离心机；芬兰MK3型酶标仪；CSS200型超声波粉碎机为山东济宁无线电仪器厂产品。方法心肌细胞的原代单层培养心肌细胞的培养采用姜玉顺等［4］建立的原代单层培养方法。培养心肌细胞"缺氧"损伤模型的制备将生长良好的培养心肌细胞的培养基倒掉，以预先饱和纯氮气40min的N2饱和缺氧培养基冲洗2次，取N2饱和缺氧培养基3ml加入培养瓶中，同时向瓶内充氮气10s以置换瓶内空气，置于37°C二氧化碳培养箱中，12h后备用。分组及处理取生长良好的培养瓶36瓶随机分为4组:正常组、模型组、对照组及实验组。正常组更换正常培养基培养；

8、模型组更换N2饱和缺氧培养基培养；对照