黄芩苷对心肌梗死大鼠心肌细胞保护作用的研究.pdf

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1、实验研究中国民阍疗法CHINA’SNATUR0PATH丫_Moy2015．Vol23No5黄芩苷对心肌梗死大鼠心肌细胞保护作用的研究※马萍纪中戚汉平曹永刚黄伟(哈尔滨医科大学，黑龙江大庆163319)心血管疾病的发病率逐年上升，已经成为继肿瘤之2．Westernblotting检测Bax及Bcl-2蛋白水平，后威胁全人类健康的第二大疾患。其中因冠心病死亡提取心肌总蛋白，BCA一100法测定蛋白含量。取100／zg的占其死亡总数的5O9／6左右，且呈上升趋势，心肌梗死等量蛋白经1OSDS-PAGE电泳后转至PVDF膜上，是冠心病中常

2、见的严重类型。临床上寻找新的更有效、用含5脱脂奶粉封闭1h后分别与小鼠抗大鼠Bax、更安全、更经济的防治方法仍是研究的热点问题。黄芩Bcl一2及兔抗大鼠GAPDH抗体(以TBS稀释，浓度分苷具有抗氧化、抗炎、保护缺血后受损心肌细胞的作用，别为1：500、1：200)室温孵育2h；洗膜后与二抗(兔临床上已经广泛运用于各种心血管疾病的治疗。本课抗小鼠及山羊抗兔IgG)室温孵育1h，化学发光显影，题旨在研究黄芩苷预处理对大鼠心肌的保护作用及其凝胶成像系统拍照、扫描分析。以目的条带和GAPDH调控机制，为黄芩苷的开发研制及心肌梗死(AMI

3、)的条带吸光度比值作为半定量结果。防治提供理论依据。3．荧光定量PCR半定量检测心肌肌钙蛋白(cTn—材料T)mRNA表达：提取心肌总RNA，计算RNA的纯度，1．药品及试剂：黄芩苷(嘉迪欧公司提供，批号：进行逆转录反应(TaKaRa)，合成的cDNA储存在GDL2O120224A)，Bax及Bcl一2小鼠抗大鼠单克隆抗体一20℃条件下备用。以J3一actin为内参照，引物如下：(购于Abcam)，GAPDH兔抗大鼠多克隆抗体(购于cTn—T上游5’一ACCTATGCCGGCAGCTTCA一3’，SantaCruz)，RNA试剂盒

4、、荧光定量PCR试剂盒及引下游5’一GAGAGTGGGCCGCTTAAACTTG一3’，物设计(均为TaKaRa产品)。t3-actin上游5’一GCGAGAAGATGACCCAGA2．动物与分组：30只健康Wistar大鼠(由哈尔滨TC一3’，下游5’一CCAGTGGTACGGCCAGAG医科大学动物中心提供)，体重2lO～230g，随机分为三G一3’。合成cDNA。定量PCR检测为20L反应体组，每组10只。假手术组(Sham)、心肌梗死模型组(简系，反应液中包括SYBRPremixExTaqTM10tLL，称心梗模型组)(M

5、I)、黄芩苷组(BAI)。各组依次连续PCRforwardprimer及PCRreverseprimer各0．4L，4周分别灌胃给药生理盐水、BAI400mg／kg·d，末次RoxReferanceDye0．4L，ddH2O6．8肛L，模板给药30min后建立大鼠急性心肌梗死模型。cDNA2L。cTn—T及8一actin的PCR反应条件为95℃方法30S，1个循环，95℃10s、62℃3lS45个循环。1．心肌梗死模型的制备：Wistar大鼠腹腔注射4．标准曲线的制备，将PCR产物按照1／5倍浓度19／6戊巴比妥钠40mg／kg麻

6、醉，颈部至剑突去毛，分离梯度进行稀释，选择1000o、2000、400、80、16、3．2浓度气管，连接麻醉呼吸机，开胸后进行辅助呼吸。呼吸频的稀释产物作为标准模板，进行荧光定量PCR反应。率16～18次／rain，吸气／呼气比为1：2，潮气量350～通过这6个标准品生成的反应数据，绘制标准曲线]。550mL。连接心电图导联，分别为右上肢、左下肢、腹结果部(肢体Ⅱ导联)，在大鼠胸骨左缘第3、4肋间开胸暴露1．Westernblotting检测Bax及Bcl一2蛋白水平，心脏，轻压挤出心脏，s／o号细线结扎冠状动脉左前降心梗模型组大

7、鼠心肌细胞Bax蛋白表达高于假手术支起始端，迅速将心脏放回胸腔，排出空气，闭胸ll1]。假组，差异有统计学意义(P<0．05)；黄芩组大鼠心肌细手术组只穿线不结扎。胞Bax蛋白表达低于心梗模型组(P

8、ATUR0PATHMoy2015．Vol23No．5表1黄芩苷对心肌梗死大鼠心肌细胞色素C释放，促进细胞凋亡；③Bax本身具有促进细胞Bax及Bcl一2蛋白表达的影响(士)凋亡的作用。Bcl一2家族是公认的凋亡抑制基因，可抑制多种因素如氧自由基和p