三氧化二砷对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的作用机制

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1、三氧化二砷对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的作用机制作者：梁军，高永丽，赵园园，姚如永，尚庆军，高士芳，胡晓晓【摘要】目的：探讨不同剂量As203对人胃癌细胞株SGC7901裸鼠皮下移植瘤的体内抑瘤作用及作用机制.方法：建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型，随机分为实验组即As203低（1.0mg/kg）中（2.5mg/kg）高（5.0mg/kg）剂量组、空白对照生理盐水组及阳性对照5FU组（20mg/kg），腹腔连续给药10d，计算抑瘤率，检测用药后裸鼠的肝肾功能及血常规，观察用药前后裸鼠体重改变，实时定量RTPCR检测移植瘤内ca

2、spase3基因相对表达量.结果：低剂量As203组及5FU组抑瘤率分别为60.6%和78.2%，与生理盐水组比较有统计学差异（P<0.05）,中高剂量组及5FU组差异无统计学意义（P>0.05）.用药后低剂量As203组caspase3的基因表达显著增高，与生理盐水组比较有统计学意义（P<0.05）,中高剂量组在数值上caspase3表达增高，但无统计学差异（P>0.05）.各剂量组均出现白细胞抑制，但较5FU组轻，肝肾功能未见异常.结论：低剂量As203表现出抑制肿瘤生长的作用,其机

3、制可能与上调caspase3基因的表达有关；As203对肝肾无明显毒性.【关键词】三氧化二砷；胃肿瘤；小鼠，祼；肿瘤移植；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3　0引言　　　　胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及癌症相关死亡率高［1］，现有化疗药物有效率低缓解期短，延长生存有限［2］，因此探索新的化疗药物具有重要的临床意义.目前在细胞及小鼠体内水平的研究均发现As203能抑制体外培养胃癌细胞及小鼠胃癌的生长［3-5］，在此基础之上，本实验通过建立人胃癌裸鼠移植瘤模型在体内水平对As203的体内抗人胃癌作用进行疗效观察及机制研究，为

4、As203用于临床治疗提供实验依据.　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1细胞株和实验动物人胃癌细胞株SCG7901,购自中国科学院上海生物研究所.Balb/cnu裸小鼠，25只，4~6ePCR反应试剂盒购自日本TaKaRa公司.　　1.2方法　　1.2.1细胞培养和动物模型的建立胃癌细胞株SCG7901培养于含100mL/L标准胎牛血清的RPMI1640培养液中，在37℃,50mL/LCO2的条件下培养，收集对数生长期的细胞制备成浓度为3×1010/L的单细胞悬液，在超净工作台内于裸鼠腹股沟区皮下注射0.15

5、mL的单细胞悬液，注射局部出现明显皮丘，7d后所有裸鼠均出现直径大于5mm的皮下结节，移植瘤模型建立.　　1.2.2裸鼠分组和给药于接种后8d将已建立皮下移植瘤模型的25只裸鼠随机分为5组，即生理盐水组（空白对照组）,5FU组（阳性对照组）、As203高中低剂量组（1.0,2.5及5.0mg/kg）,每组5只.并于当日将As203及5FU注射液稀释适当浓度腹腔给药，生理盐水组生理盐水0.4mL,ip,连续给药10d，给药期间每天观察各组裸鼠的精神、饮食、活动、大小便等一般情况于停药后第2日处死裸鼠，剥离瘤组织，称取瘤重

6、并按下面公式计算抑瘤率：瘤重抑瘤率=(1一实验组平均瘤重／对照组平均瘤重)×100％.采用摘眼球取血方法采集血样以备血常规及生化检测.肿瘤组织于-70℃冰箱保存.　　1.2.3RealtimeRTPCR按照Trizol说明书提取瘤组织中总RNA，分光光度计检测260/280吸光光度比值，选取比值在1.8~2.1之间的RNA样本.采用TaKaRa的反转录反应体系进行反转录反应以合成cDNA，以管家基因GDPH为对照，采用Taq探针法应用LightCyclerRealTimePCR(RocheDiagnostics公司)扩

7、增仪进行PCR反应，用20μLTaKaRaPCR反应体系，反应条件为95℃5s变性，60℃30s退火及延伸，40个循环.用RocheLightCyclerprobedesignsoftRNA的数目.　　统计处理：数据以x±s表示，采用SPSS12．0统计学软件进行分析，多样本均数比较采用方差分析，两组间比较采用SNKq检验，以P<0.05为检验水准.2结果　　2.1As203的抑瘤作用用药后低剂量As203组及5FU组肿瘤生长明显减慢，移植瘤的重量显著低于其他组(表1)，与生理盐水组相比较差异有统计学意义（P&l

8、t;0.05），但5FU组及低剂量As203组肿瘤重量差异无统计学意义且中高剂量组与生理盐水组比较差异无显著性（P>0.05），提示低剂量As203有显著的抑瘤作用而中高剂量的As203未表现出抗肿瘤作用.　　表1As203对胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用（略）　　aP<0.05vs生理盐水.