real time pcr与常规血培养在血流感染未知病原体鉴定中的比较研究

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1、RealtimePCR与常规血培养在血流感染未知病原体鉴定中的比较研究焦巍彭莉长沙市妇幼保健院检验科，湖南长沙410007[摘要]目的观察realtimePCR在血流感染病原体检测中的敏感性和特异性，并与常规血培养对比，探讨其临床应用价值。方法以该院各临床科室收集的108份脓毒血症患者血液标本进行realtimePCR检测，同时进行常规血培养，比较两种方法的特异性和敏感性。结果108份标本当中，两种方法检测出12种病原微生物。RealtimePCR共检测出阳性标本25份，阴性标本83份。其中与血培养共同阳性标本9份，共同阴性标本78份。两方法的一致

2、性为80.6%。RealtimePCR的阴性预测值是0.94，敏感性64%，特异性83%。16例标本realtimePCR阳性而血培养阴性，5例标本血培养阳性而realtimePCR阴性。同时，有2病标超出realtimePCR的检测范围，而血培养阳性。此外，realtimePCR无法检测光滑念珠菌。结论realtimePCR虽然能快速检测血液感染中病原微生物，但依然不能完全替代血培养。.jyqkail：[email protected]。对于脓毒血症患者而言，准确快速快速血流病原体，是指导抗生素治疗最有效的措施[1]。尽管经验性使用抗生

3、素可及时挽救患者生命，但由于耐药菌逐年增多，因此对于抗生素疗效甚微的患者，有必要根据病原体的类型调整治疗手段[2]。传统诊断血流感染的方式是血培养，虽然目前全自动的仪器已经广泛应用与临床，但最终的培养结果往往是需要等待12～48h。对于生长缓慢且营养需求复杂的病原体（如酵母菌）可能需要更长的时间。更为重要的是，若患者先前使用过抗生素，血培养的阳性率一般更低[3]。随着分子生物学技术的发展和应用，直接从血液标本中对细菌或真菌的核酸进行扩增是鉴定病原体感染的有效手段[4-5]。该研究2013年1—8月间通过荧光定量PCR检测血流感染患者中的病原体，并与

4、常规血培养进行对比，旨在评价其在临床中的应用价值。1资料与方法1.1一般资料该研究纳入的脓毒血症患者为该院各临床科室收治的患者90例，共获取标本108份。其中男52例，女38例，平均年龄（43.5±11.5）岁。其中60例患者（66.7%）来自ICU、麻醉科和肿瘤内科，其他30例（33.3%）来自内科和血液科。93例患者（86.1%）在采集血液时已经接受过抗菌素治疗。1.2研究方法使用静脉穿刺术获取的血液样本同时进行BC和SF。其中血培养采用BectonDickinson公司生产的Bactec9120血培养仪，在37℃培养1～5d，并根据相应方法分

5、离并鉴定微生物。同时，将静脉穿刺得到的含有EDTA血液5mL用于realtimePCR分析。其步骤根据SeptiFastLys、SeptiFastPrep和LightCyclerSeptiFast试剂盒的操作进行。realtimePCR仪器型号为LightCycler2.0（Roche）。1.3结果分析根据.jyqkePCR的灵敏度、特异性、阳性预测值（positivepredictivevalues，PPV）、阴性预测值（negativepredictivevalues，NPV），同时计算两种方法的一致性。1.5统计方法采用SPSS19.0软件处

6、理数据，并根据realtimePCR结果计算其灵敏度、特异性、PPV、NPV和一致性。2结果2.1临床标本中病原菌的分布情况90例患者培养标本共分离获得12株致病菌。其中革兰阳性球菌6种，革兰阴性杆菌5种，真菌1种。常见的细菌包括金大肠杆菌，黄色葡萄球菌，粪肠球菌，铜绿假单胞菌等。2.2两种方法细菌检出率比较108例血液样本中，两种方法均检测阴性79例，阳性7例。5例标本血培养阳性而realtimePCR阴性。16例标本血培养阴性而realtimePCR阳性。realtimePCR与血培养的NPV是94%（78/83），敏感度是64%（9/14），

7、特异度是83%（78/94）。在16例realtimePCR阳性而血培养阴性标本中，包括埃希菌属6例，肠球菌属3例，肠杆菌属3例，假单胞菌2例，金黄色葡萄球菌2例。见表1。2.3RealtimePCR假阴性情况该本研究中，有5例患者realtimePCR阴性，而血培养阳性，假阴性率为4.6%（5/108），3例分别为包括多杀性巴氏杆菌2例，解没食子酸链球菌1例。由于先前在realtimePCR扩增列表中并未设定，因此未予以检出。另2例realtimePCR阴性的细菌为光滑念珠菌。3讨论由于realtimePCR将PCR反应和检测一次性完成，大大降低

8、了污染的可能性，因此在临床病原体中已经得到了广泛的应用[5，7]。但有关realtimePCR用于血流感染中对病原微生物进