茶黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

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1、茶黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关基因的影响作者：蔡飞，李彩蓉，吴基良，闵清，欧阳昌汉，余薇【摘要】　　目的探讨茶黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关基因的影响。方法采用线拴法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。大鼠随机分为缺血组，假手术组，茶黄素小剂量组(10mg/kg)，茶黄素大剂量组(20mg/kg)。缺血2h，再灌注24h后处死动物，于再灌注前舌下静脉给药。测定大鼠神经系统症状，脑梗塞体积，脑组织MDA，NO含量以及SOD和GSH-Px活性，采用TUNEL法检测脑组织细胞凋亡，采用免疫组织化学法检测凋亡

2、相关基因Caspase-3的表达。结果茶黄素治疗组与模型组相比神经系统症状减轻，脑梗塞体积缩小，脑组织MDA，NO含量减少，SOD和GSH-Px活性增加。脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达减少。结论茶黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其作用机制可能与抗氧化和抑制细胞凋亡有关。【关键词】茶黄素缺血再灌注细胞凋亡Caspase-3　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectoftheaflavinoncellapoptosisandapoptosisrelatedgeneafterfocalcerebra

3、lischemiainjuryinaratmodelofmiddlecerebralarteryocclusion(MCAO).MethodsMaleSprague-Daeasured.Thecontentsofmalondialdehyde(MDA),andnitricoxide(NO)inbrainsutase(SOD)andglutathioneperoxidase(GSH-Px)munohistochemistrytodetecttheexpressionofcaspase-3protEinicgroup.Theactivitiesof

4、SODandGSH-Pxintheaflavin-treatedgroupsicgroup.Theaflavin-treatmentalsodecreasedneuronalapoptosisandtheexpressionofcaspase-3protEIn.ConclusionTheaflavinhasprotectiveeffectsonfocalcerebralischemicreperfusioninjurythroughinhibitingoxidativestressandlesseningapoptosis.　　Keyia-re

5、perfusion;Apoptosis;Caspase-3　　据国内外流行病学调查表明，脑血管病是一类严重威胁人类健康和寿命的常见病，多发病，是目前世界上导致人类死亡的三大主要疾病之一。在我国，脑血管病已经上升为第一位致死致残疾病。脑缺血后能量代谢障碍、细胞内Ca2+超载及其所引发的谷氨酸的兴奋性毒性反应是神经元损伤的始动环节，由此产生一系列生化反应。在脑缺血损伤中，细胞凋亡是由各种凋亡刺激信号始动，受细胞内源性基因、酶类和信号传导途径等调控的“瀑布式”激活过程。自由基、细胞内钙超载等均是促进凋亡的诱导因素。这些因素都是通过一定的信号传导途径激

6、活凋亡相关基因，然后将信号传递到核内切酶，而执行死亡的功能。其中蛋白酶与细胞凋亡密切相关，凋亡的发生是一个复杂的、由caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程。进一步探讨并揭示脑缺血/再灌注时损伤的机制，有助于采取相应的干预措施阻断炎症的级联反应,减少神经元死亡，对临床更有效地防治缺血再灌注性脑损伤具有十分重要的理论和实际意义。茶黄素（theaflavin,TF1）是红茶中的多酚类化合物之一，具有很强的抗氧化、抗炎、清除自由基、抗肿瘤等作用［1～4］。我们首次观察到茶黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用，并发现其保护机制可能与抗氧化和

7、抑制细胞凋亡有关。　　1材料与方法　　1.1试剂　　茶黄素(MicroSourceDiscoverySystem,Inc.Gaylordsville,CT)，纯度98％。GSH-Px，MDA，SOD试剂盒（南京建成）。其余试剂均为国产分析纯。　　1.2动物模型　　雄性CAO）模型以Longa［4］法为标准，选用尼龙线栓塞右侧大脑中动脉。10%的水合氯醛0.35ml·（100g）-1腹腔注射麻醉，颈部皮肤用碘伏消毒，作正中皮肤切口，分离肌肉，找出右颈总动脉（CCA）并游离，穿线备用。沿右侧颈总动脉向头端分离颈内、外动脉，颈外动脉（ECA）及其分支

8、穿线结扎。沿颈内动脉（ICA）向颅内方向分离，至翼额动脉，分离翼额动脉并于其根部结扎。然后结扎颈总动脉。在颈总与颈内外动脉分叉处剪一小口，用0.2mm