比色法测定甘草中总皂苷的含量

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1、比色法测定甘草中总皂苷的含量【摘要】目的建立甘草中甘草总皂苷含量的测定方法。方法用香草醛高氯酸试剂，在589nm处有最大吸收，并对比色条件进行了优化。结果该法精密度高，1h内稳定，平均加样回收率为99.03%。结论此法简便、准确、稳定性、重复性好，可用于甘草总皂苷的测定。【关键词】甘草；总皂苷；香草醛高氯酸DeterminationofTotalSaponinsinGlycyrrhizabyColorimetry　Abstract：ObjectiveToestablishthemethodofdeterminationoftotalsaponinsinGlycyrrhiza

2、.MethodsUseVanillinHClO4asthechromogenicreagentanddetectthemaximumabsorptionatthe.Choosethebestchromogenicpreparationtodeterminethecontentsofthesamples.ResultsTheprecisionofthemethodishigh.Thecolorofthetreatedsamplesethodissimple,accurate,highlysensitiveandreproducible.Itmaybeusedforthequan

3、titativedeterminationoftotalsaponinsinGlycyrrhiza.　　Keyinosae）甘草属（Glycyrrhiza）植物，为我国重要的传统中草药。甘草属植物在世界上共有30余种，我国有8种，分布在内蒙、西北、东北等地。目前，被《中国药典》认定的甘草药材原植物有3种［1］，即乌拉尔甘草、胀果甘草和光果甘草的根及根茎。其中以乌拉尔甘草分布最广，产量最多，质量最好。研究发现甘草属植物中三萜类皂苷具有含量高、生理活性强的特点，不仅具有抗溃疡、消炎、解毒等生理活性，今年研究还发现具有抗病毒、抗癌活性。皂苷定量分析方法的研究已有很多报道［2～7］，包

4、括重量法、比色法、薄层扫描法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）等。重量法具有测定值稳定、重现性好等特点，但分析流程时间长，操作繁琐，试剂消耗量大，得到的皂苷中一般混有一定量的杂质，使结果偏高，误差较大。比色法一般采用香草醛－硫酸比色法［2］。张中伟发现香草醛－硫酸法稳定性差，而香草醛高氯酸作为三萜皂苷常用的显色剂，较香草醛硫酸的精密度高，且受糖类干扰较小［6］。薄层扫描法和高效液相法对测定样品、设备要求较高，且只适合一些特定皂苷的测定。综合考虑，以香草醛高氯酸作为显色剂，测定甘草中总皂苷的含量，建立一种简便、准确的方法。　　1器材　　1.1仪器721型分光光度计，上海

5、分析仪器厂；KQ50DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；AB204S型分析天平，METTLER公司；紫外扫描分光光度计，岛津UV240。　　1.2试剂高氯酸，甲醇，香草醛，冰醋酸（以上试剂均为分析纯），甘草酸单铵盐标准品（甘草酸单铵盐10mg溶解于甲醇中定容至10ml，浓度为1mg·ml-1，甘草（购于黑龙江省大庆市大同区）。　　2方法　　2.1最大波长的确定准确吸取0.5ml标准品溶液，置于10ml具塞试管中，70℃水浴挥干溶剂，加入0.2ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，摇匀，于55℃水浴中加热20min，立即取出用流水冷却至室温，加

6、入冰醋酸5ml稀释，摇匀，以不加标准品的样品管为空白，于400～700nm波长处进行扫描。　　2.2比色条件的优化　　2.2.1最佳显色时间的确定取5份0.2ml对照品溶液，分别置具塞试管中，70℃水浴挥干溶剂，各加入0.2ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，摇匀，于60℃水浴中加热不同时间（5，10，15，20，25min），立即取出用冷水冷却至室温，加入冰醋酸5ml，摇匀，于最大吸收波长处测定其吸收值。　　2.2.2最佳显色温度的确定分别取5份0.2ml对照品溶液，依上法操作，在不同温度（50，55，60，65，70℃）水浴20min，同上进行测定。　　

7、2.3显色稳定性的考察精确吸取标准样溶液0.2ml，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色，在1h内，每隔5min测定吸收值的变化情况。　　2.4标准曲线绘制精确吸取标准液0.1，0.15，0.2，0.25，0.3ml分别置于10ml具塞试管中，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸光值，每个浓度平行测定3次，以皂苷的质量为横坐标，吸光度为纵坐标作图得到回归方程。　　2.5样品待测液的制备准确称取脱脂后的甘草粉0.2g（40目）于10ml具塞试管中，准确加入甲醇4ml(含1%氨水)，加塞后放入超