大豆苷元对神经母细胞瘤细胞增殖的抑制作用

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1、大豆苷元对神经母细胞瘤细胞增殖的抑制作用作者：徐鹰朱恒英，李舒梅，赖日勇，唐丹【摘要】　　目的探讨大豆苷元对神经母细胞瘤ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞凋亡和增殖的影响。方法采用细胞生长抑制实验（ＭＴＴ法）、流式细胞仪检测等方法观察ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的形态变化、细胞凋亡率及细胞周期变化。结果１０．０～８０．０μｇ／ｍｌ的大豆苷元明显抑制细胞的增殖，且有剂量依赖性；与对照组相比，大豆苷元处理２４ｈ后，各组ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞均出现亚二倍体峰（Ｓｕｂ－Ｇ１），细胞凋亡率与大豆苷元呈剂量依赖性。结论大豆苷元可诱导神经母细胞瘤ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞凋亡，对Ｓ

2、Ｈ－ＳＹ５Ｙ细胞增殖有明显的抑制作用。【关键词】神经母细胞瘤大豆苷元增殖　　Abstract：ObjectiveＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＤａｉｄｚｅｉｎｏｎｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ．MethodsＴｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ.Ｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Results１０．０～８０．０μｇ／ｍｌｏｆＤａｉｄｚｅｉｎｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏ

3、ｆＳＨ－ＳＹ５Ｙｃｅｌｌ，ＤａｉｄｚｅｉｎｅｘｔｒａｃｔｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＳＨ－ＳＹ５Ｙｃｅｌｌａｎｄｔｈｅｒａｔｅｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ.　　２结果　　２．１大豆苷元对ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的生长抑制作用细胞增殖抑制实验结果显示，与正常对照组相比，大豆苷元各浓度组处理２４～７２ｈ的细胞抑制率与正常对照组比较均有显著性升高（P＜０．０５）（表１，图１）。大豆苷元处理ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞２４，４８，７２ｈ的ＩＣ５０分别是６５．０，４７．０，４０．０μｇ／ｍｌ。以上结果表明大豆苷元对ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的体外增殖具有

4、较强的抑制作用，其抑制作用在一定的范围内有剂量和时间依赖性，并呈现出一定的饱和性。　　图1大豆苷元对SH-SY5Y细胞体外增殖的抑制作用（略）　　２．２　大豆苷元对ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞周期和凋亡的影响药物处理４８ｈ后，大豆苷元各浓度组均能诱导Ｈ－ＳＹ５Ｙ细胞凋亡，Ｇ１峰前出现亚二倍体峰（Ｓｕｂ－Ｇ１），即凋亡细胞所特有的凋亡峰（图２）。大豆苷元诱导ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞凋亡呈现一定的剂量依赖性，细胞凋亡率显著高于正常对照组（P＜０．０５）。随着大豆苷元浓度的升高，Ｇ０／Ｇ１和Ｇ２／Ｍ期的细胞明显减少，ＤＮＡ合成期（Ｓ期）细胞数均明显增多

5、，表明大豆苷元使ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞发生Ｓ期阻滞，抑制细胞增殖。　　图2大豆苷元对SH-SY5Y细胞周期和凋亡的影响（略）　　３　讨论　　ＮＢ治疗十分棘手，人们一直在积极寻找新的治疗药物。我国中医中药用于治疗肿瘤历史悠久，具有疗效确切、毒副作用低等优点。大豆异黄酮是重要的植物化学物质，由１２种单体组成，包括金雀异黄素、大豆苷元、黄豆黄素３种苷元及这３种苷元衍生的９种苷类成分。大量研究表明［３，４］大豆异黄酮类化合物在高浓度时具有防癌抑癌作用。近年来，从细胞凋亡角度探讨中草药抗肿瘤作用机制及从天然药物中筛选抗癌药物已成为研究热点。本研

6、究采用ＭＴＴ法和流式细胞仪检测了大豆苷元对ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。　　细胞的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。ＭＴ结果也表明大豆苷元对ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的体外增殖具有明显的抑制作用，在１０～８０μｇ／ｍｌ的范围内其抑制作用随药物浓度的增加及作用时间的延长其抑制作用更加明显；当浓度大于８０μｇ／ｍｌ后，其抑制作用不再随药物浓度增加和作用时间延长而进一步增强，呈现出一定的饱和性。流式细胞仪检测结果显示大豆苷元能诱导ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞凋亡，且随大豆苷元浓度的升高，Ｇ０／Ｇ１ＨＥＧ２／Ｍ期的细胞数明显减少，ＤＮＡ

7、合成期（Ｓ期）明显增多，提示大豆苷元可使ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞发生Ｓ期阻滞，从而抑制细胞增殖。目前对于大豆异黄酮类物质抑制细胞增殖的机理研究认为它抑制细胞增殖的主要包括性激素样作用、抗氧化作用、诱导细胞凋亡的作用、抑制酪氨酸蛋白激酶的活性和抑制拓扑异构酶的活性等［５～８］。我们研究表明大豆苷元能通过使ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞发生Ｓ期阻滞来抑制ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的增殖。是否还存在其他途径抑制ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的增殖，在本实验中没有涉及，尚不得而知。　　总之，本研究表明大豆苷元在体外对ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的增殖有明显的抑制作用并能诱导细胞凋亡，尽

8、管目前对其是通过激活细胞凋亡的那条途径来诱导ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞凋亡尚不得而知，有待进一步研究，但本研究还是可以为ＮＢ的治疗提供一种新思路。【参考