骨折愈合过程中bmp2和tgfβ1mrna的表达

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1、骨折愈合过程中BMP2和TGFβ1mRNA的表达【关键词】骨形成蛋白　　关键词:骨形成蛋白;转化生长因子β;骨折愈合;凋亡;原位杂交;原位末端标记法　　摘要:目的探讨骨折愈合过程中骨形成蛋白2（BMP2），转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA的表达与凋亡发生的相关性及意义.方法建立颌骨骨折模型，利用原位杂交方法检测骨折愈合的不同时期BMP2和TGFβ1mRNA的表达，同时采用TUNEL法检测细胞凋亡，并进行相关性分析.结果①骨折愈合早期（5～11d）的间充质细胞、成骨细胞和软骨细胞内有BMP2mRNA表达，

2、而TGFβ1mRNA主要在骨折愈合后期（11～14d）的成骨细胞和软骨细胞内表达;②细胞凋亡在骨折愈合的5d和11d最多，以间充质细胞和软骨细胞为主;③BMP2mRNA的表达与凋亡具有正相关（r=0.887，P<0.01），TGFβ1mRNA的表达与凋亡无相关性（r=0.51，P>0.05）.结论骨折愈合过程伴随凋亡的发生，以控制细胞的数量和清除无用的细胞，BMP2可能直接参与了凋亡发生过程.　　Keyorphogeicprotein;transforminggroor-phogeicprotei

3、n2（BMP2），transforminggroRNAexpressionandapoptosisduringfracturehealinganditssignificance.METHODSAnexperimental　modeloffractureRNAandapoptosisinthedifferentstagesofhealingbyusinginsituhybridizationandTUNELmethods.RESULTS①BMP2mRNAesenchymalcells，osteoblastsan

4、dchondrocyteson5～11dRNAinosteoblastsandchondrocyteson11～14dpost-fracture;②theapoptoticcellsincreasedmarkedlyon5dand11d，especiallyinmesenchymalcellsandchondrocytes;and③thereRNAexpressionandapoptosis（r=0.887，P<0.01）.TGFβ1mR-NAandapoptosishadnocorrelation（r

5、=0.51，P>0.05）.CONCLUSIONApoptosisisanormalconitantoffrac-turehealingservingthepurposesofcontrolingcellnumberandeliminatinguselesscells.BMP2mayparticipatedirectlyininducingtheapoptoticprocess.　　0引言　　骨折修复愈合包含了细胞趋化、聚集、增殖和分化等一系列复杂的组织变化，有许多生长因子参与了这一过程，如BMP，TG

6、Fβ，FGF等，它们在胚胎发育的细胞凋亡中也扮演了重要的角色［1，2］.细胞凋亡是一种主动死亡过程，涉及一系列基因的激活、表达和调控，近年来发现凋亡也参与了创伤修复的全过程［3］.为了了解生长因子与细胞凋亡的关系，本实验在建立颌骨骨折模型的基础上，利用原位杂交法观察BMP2和TGFβ1mRNA在骨折愈合不同时期的表达，同时利用末端脱氧核苷酸酶TdT介导的dUTP-X切口末端标记（TdT-mediateddUTP-Xnickendlabeling，TUNEL）法，检测细胞凋亡的发生，探讨BMP2和TGFβ1与凋

7、亡的相关性以及在骨修复中的作用.　　1材料和方法　　1.1材料pSP65-BMP2质粒由美国遗传研究所annheim公司;TGFβ1寡核苷酸探针和TUNELkit购自美国OncogeneSci-ence公司.家兔骨折模型的建立、标本处理（骨折后1，3，5，7，11，14，21和28d取材）、探针标记及原位杂交等均参照以往方法进行［4］.正常骨作为对照.1.2方法切片常规脱蜡至水，PBS（0.05molL-1，pH7.5）洗5min，蛋白酶K孵育15min;PBS洗涤后，在30mLL-1H2O2中孵育5min;

8、PBS洗涤后擦干切片周围，加平衡buffer25μL，37℃孵育1min;擦干切片周围，加TdT酶25μL，37℃孵育2h后，加入37℃预热的中止buffer，37℃孵育30min，每10min更换中止buffer1次;显色过程同原位杂交.正常骨作为对照.利用10×10网格，在40×物镜下，每个时间点随机选取5个视野（向同一方向移动切片，不重复，不重叠），分别对BMP2和TGFβ1mRNA及凋亡阳性