骨质疏松骨折愈合过程中TGF┐β1mRNA的基因表达

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1、骨质疏松骨折愈合过程中TGF┐β1mRNA的基因表达【关键词】骨质疏松　　关键词:骨质疏松;骨折;转化生长因子β;核酸杂交　　摘要:目的探讨Ⅰ型骨质疏松骨折愈合的病生机制，检测骨质疏松性骨折愈合过程中TGF-β1mRNA的基因表达模式及细胞定位.方法利用去势SD大鼠造成Ⅰ型骨质疏松及其骨折模型，通过原位杂交、斑点杂交检测骨痂局部TGF-β1mRNA的表达.结果骨质疏松骨折与正常骨折愈合过程中TGF-β1mRNA基因表达的细胞定位未见差别;TGF-β1mRNA表达的变化模式与正常骨折愈合过程相似.结论TGF-β1基因表达的改变与骨质疏松骨折愈合的病生改变

2、未见关联.　　Keywords:osteoporosis;fractures;transforminggrowthfac-torbeta;nucleicacidhybridization　　Abstract:AIMToassessthechangesofgeneexpressionofthetransformgrowthfactors-β1intheprocessofthehealingoftheosteoporoticfractureinovariectomizedfemaleSDrats.METHODSOvariectomizedfemaleSDr

3、atswereusedasmodeloftypeIosteoporosisandosteoporoticfractureandthechangesofgeneexpressionofthetransforminggrowthfac-tors-β1weredetectedintheprocessofthehealingoftheos-teoporotic9fracturethroughinsituandblothybridization.RESULTSTherewasnodifferenceofthecellularlocaliza-tioninTGF-

4、β1expressionbetweentheprocessesofthenor-malandosteoporoticbonehealingbyinsituhybridization;ThepatternofthegeneexpressionofTGF-β1mRNAwas　similartothenormalintheprocessoftheosteoporoticbonehealingbydotblothybridization.CONCLUSIONExpres-sionofTGF-β1mRNAisnotrelatedtothepathophysiol

5、ogicalchangesintheprocessofosteoporoticbonehealing.　　0引言　　转化生长因子β（TGF-β）是骨组织中含量最丰富的细胞生长因子之一［1］，它既具有促进成骨细胞分化增殖，刺激骨形成，又具有支持破骨细胞形成，刺激骨吸收的双重作用，是骨形成与骨吸收之间重要的偶联调节因子［2，3］.另外，TGF-β在骨折愈合过程的不同时期具有促进细胞分化，诱导骨、软骨形成及钙化等作用［4-6］.我们利用去势SD雌性大鼠作为Ⅰ型骨质疏松及其骨折模型，通过原位杂交、斑点杂交，对骨质疏松性骨折骨痂局部TGF-β1mRNA基因表达的

6、细胞定位和表达模式进行了研究，这有助于从基因表达水平深入了解骨质疏松骨折愈合的病生机制.9　　1材料和方法　　1.1动物模型的建立所有实验动物选用纯种Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠，体质量在250～450g（本校实验动物中心提供），鼠龄6～9mo，共120只，随机分为骨质疏松组（OVX）及假手术对照组（Sham），每组随机分为骨折组及非骨折对照组;骨折组以骨折后1，4，9，13及28d又各分为5组，每组均10只.10gL-1戊巴比妥钠（40mgkg-1）ip麻醉下经背侧切口，OVX组行双则卵巢切除术，Sham手术组做双侧卵巢暴露，即关闭切

7、口.术后2mo，骨折组动物ip麻醉下先用0.5mm齿科钢丝行胫骨髓腔内固定术，后用专用大鼠骨折器，于大鼠双侧胫骨中段造成闭合性骨折.分别于1，4，9，13及28d时间段无菌条件下取材，一侧标本多聚甲醛固定、复合脱钙液脱钙、石蜡包埋，0.5μm切片用于原位杂交;另侧标本直接放入液氮冷冻保存，用于总RNA提取.取材范围包括两骨折端及其间组织.　　1.2原位杂交TGF-β1cDNA探针购于北京医科大学免疫教研室，探针标记按地高辛标记及检测试剂盒（宝灵曼公司）说明进行.组织切片脱蜡，0.2molL-1盐酸处理5min，蛋白酶K（10mgμL-1）消化10min

8、，杂交探针浓度为300～50ngmL-1，42℃恒温杂交10～16h.15000封闭液稀释酶标