大鼠皮质脊髓束luxol fast blue染色

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1、大鼠皮质脊髓束LuxolFastBlue染色：吕广明，吴辉群，栗卓，刘苏，韩笑，季达峰【摘要】目的：探讨显示大鼠皮质脊髓束的特殊染色方法。方法：选用正常成年SD大鼠延髓和脊髓冰冻切片，应用LuxolFastBlue染色法进行染色。结果：LuxolFastBlue染色后，在延髓和脊髓切片中可见灰质呈淡红色，白质呈蓝色，延髓锥体染成深蓝色。锥体中LuxolFastBlue标记的深蓝色阳性纤维，经锥体交叉后至脊髓灰质后连合背侧，沿脊髓后索腹侧深层下行，至荐段后逐渐消失。在延髓锥体和脊髓颈、胸、腰段后索中，深蓝色的LuxolFastBlue阳性纤维边界清晰，与周围结

2、构区分明显。结论：运用LuxolFastBlue染色可清楚显示大鼠皮质脊髓束在脊髓内的定位，是一种简便可靠的皮质脊髓束形态学研究方法。【关键词】皮质脊髓束；LuxolFastBlue；髓鞘染色；大鼠[Abstract]Objective:Toexplorethespecialstainingmethodforrevealingthelocalizationofcorticospinaltractinrats.Methods:LuxolFastBluestainingmethodedullaoblongtaandspinalcordofthenormaladu

3、ltSprague-Daatterofmedullaoblongtaandspinalcordatteraroundthegraymatteridpassedthroughthepyramidaldecussationtothecontralateralside,descendedattheventralpartofposteriorfuniculusjustdorsaltothegraymissurethroughoutmostofthelengthofthespinalcordandprogressivelydiminishedtoendatthesac

4、ralspinalsegments.TheLuxolFastBluepositivefibersinthepyramidandtheventralpartofposteriorfuniculusatcervical,thoracic,lumbarspinalsegmentsinatedfromthesurroundingstructures.Conclusion:UsingLuxolFastBluestainingmethodmaydemonstratethelocalizationanddistributionofcorticospinaltractint

5、hespinalcordofrats,ethodinmorphologicalstudyofcorticospinaltract.[Keyyelinstain；Rat长期以来，脊髓损伤后皮质脊髓束的再生修复研究一直是神经科学研究的热点。最近有人尝试运用微电子芯片技术重建皮质脊髓束功能[1]。此项研究中一个关键指标就是皮质脊髓束在脊髓内定位和走行情况。常用的组织学染色方法不能显示皮质脊髓束，本实验采用LuxolFastBlue染色法对大鼠皮质脊髓束进行形态学研究，取得良好效果。1材料和方法1.1材料选用健康成年SD大鼠6只，清洁级，体重250~300g,雌雄不

6、拘，由南通大学实验动物中心提供。0.1%LuxolFastBlue液（Sigma公司），LeicaCM1900冰冻切片机，显微镜为LeicaDMR显微镜（Leica公司，德国）。1.2方法切片制备：给予大鼠复合麻醉剂（0.2ml/100g体重），腹腔注射麻醉后开胸，穿心脏经升主动脉灌注，先用温（37℃）生理盐水200ml冲净血液，再用预冷（4℃）的含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液500ml快速灌注固定，1h后取脑和脊髓放入含4%多聚甲醛的PB溶液中后固定4~6h,再移入30%蔗糖的PB溶液中4℃过夜，待组织沉底后取脑（延髓）和脊髓颈、胸、腰、荐段行连续横切面冰冻

7、切片，切片厚度为30μm，直接贴于预先涂有明胶的载玻片上，置室温下晾干待用。LuxolFastBlue染色：（1）将切片放入乙醇∶氯仿溶液（无水乙醇和氯仿的体积比为1∶1）中5min；（2）将切片置入95%乙醇溶液中5min；（3）0.1%LuxolFastBlue液中56℃过夜；（4）95%乙醇溶液5min；（5）70%乙醇溶液3min；（6）双蒸水3min；（7）0.05%碳酸锂溶液分化5min，70%乙醇溶液继续分化30s；（8）双蒸水洗片；（9）镜下观察脊髓灰、白质分界是否清晰，若分界不清晰，则需重复（6）、（7）两步骤，直至分化清晰为止；（10）7

8、0%乙醇溶液3min；（11）0.5%伊红溶液1mi