关于TTC和Evans blue双染色

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1、关于TTC和Evansblue双染色?我最近在做心肌再灌注损伤后药物  保护作用方面的课题,心肌梗死面积的估算采用的是TTC和Evansblue双染色,即首先把心脏用vansBlue进行冠脉灌流，判定出缺血区（不能被染成蓝色）；再用TTC进行染色，判断出坏死区（不能被染成红色),但我做Evansblue这里老是做不好,分不出红色和蓝色,所以就想单独用TTC染色来估算面积,不知这种可行性如何,还请大家指点.Enjoyinglife发表于2009-9-409:56AM你好，我也要做这个实验了，但是我还没搞清除伊文氏蓝是不是用生理盐水配

2、，TTC是不是用蒸馏水配(好象不是)，你能不能指点我一下，谢谢！ni478发表于2009-9-410:35AM我也在做同样的东西，给你看看这个吧，挺有用的。lanuit发表于2009-9-411:14AM谢谢，你给的东西帮助很大，不过我在实验中遇到了一个问题：我们是在静脉注射evansblue，大约5－6ml，可以从心脏表面看到有染蓝和未染蓝的部分，但是，用TTC染色后，可以看到TTC未染好的部分（颜色）很浅，应该就是梗死区，可是其它部分都是红的，除了表皮上的蓝色外，没有看到里面的组织有蓝色，是不是本来就这样？还是我的实验有问题？

3、dashowertk发表于2009-9-411:53AM我今天也做了，结果只有心脏表明有蓝色，里面都没有染色。EB溶液在心脏内多长时间可以去冲洗啊lyping发表于2009-9-412:33PM我是做心肌缺血的。TTC染色后全是红色～不知道什么原因了dashuiniu发表于2009-9-401:12PM从静脉注射伊文斯蓝是正确的做法，因为冠状动脉注射你不能保证溶剂就刚好通过心脏。为保证心肌细胞不死亡，需用4摄氏度的EB的生理盐水溶剂；可以稍微延长EB在心肌中的时间至3分钟；如果心脏全部为红色，看看是不是TTC的浓度偏高，调节至1%

4、试试。这只是个人建议，愿与你共同学习。liuxsh7110发表于2009-9-403:09PM这个是个总结，都是DXY的各位战友们发的帖子，自己总结的。好久没上论坛了，希望对大家有用附件不知道为什么老是传不上，就在这贴出来吧一、TTC染色原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年首次合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。二

5、、TTC溶液配制：（1  0.1MNa2HPO4:14.2mgin1LdistilledH2O2  0.1MNaH2PO4:12mg  in1LdistilledH2O3  Mix1L0.1MNa2HPO4with0.5L0.1MNaH2PO4adjustpHto7.44  Dissolve1gTTCpowder(sigmaT8877)in100mlphosphatesolution注意事项：1、TTC新鲜配置。2、再灌注3小时以上。3、新鲜组织切薄片2mm左右放置TTC溶液内。4、TTC放置37度温箱内15-30分钟。5、如当天

6、显色不好，可从TTC中拿出置入10%甲醛过夜再看。二、心肌缺血和梗死范围测定a.完成全部采血后，开胸再次钳夹左前降支，于颈静脉注入3％Evans蓝2～3ml，（也可以切下心脏再从主动脉注入EB但切记原结扎部位一定要重扎紧）。确定未缺血与缺血心肌(未缺血心肌呈蓝色，危险区域不染色)。b.经耳缘静脉推注10%氯化钾（2ml/kg），使心脏停于舒张期,开胸取出心脏。c.生理盐水冲洗心脏，剥离心包后称重。d.将离体心脏用保鲜膜包裹，置于-20℃下保存1h，切取左、右心房及右心室标本，从非梗死区纵行切开左心室。e.将缺血区心室肌以平行于房室

7、沟的方向切成4片，每片厚1～2mm。置入1％氯化三苯基四氮唑(TTC)磷酸缓冲液(pH7.4)中37℃水浴10～15min。(避光，振荡)  f.10％福尔马林固定10ming.梗死区不染色，未梗死区染为红色，红色区与未染色区之和为缺血区。以梗死心肌（不染色的心肌）与全左心室心肌（染色与不染色的心肌）重量和比值表示心肌梗死面积。h.未染色切片固定后行组织学检测。——DowneyJM.Measuringinfarctsizebythetetrazoliummethod.In:TheISHRHandbookofExperimental

8、LaboratoryProcedures问题：一、我目前正在做梗死心肌的TTC染色，但是结果相当不满意，染色出来的心肌全是红色，无白色梗死区。而我在做TTC染色前已经用Evansblue染色心脏，显示缺血区明显，缺血时间为30分钟。我的具体操作过程