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《一株家养野猪源猪圆环病毒2型的分离与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、一株家养野猪源猪圆环病毒2型的分离与鉴定王海燕高崧*刘秀梵(扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009)摘要:应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段,在Dulac细胞中进行分离和培养,扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示,扩增产物与家猪源参考毒株的序列同源性均在98%以上,该病毒与家猪源病毒差异不大。关键词:家养野猪,猪圆环病毒2型,分离,鉴定IsolationandIdentificationofPorcineCircovirusType2Virusfrom
2、aDomesticatedWildBoarWANGHai-YanGAOSong*LIUXiu-Fan(KeyLaboratoryofAnimalInfectiousDiseasesofMinistryofAgriculture,YangzhouUniversity,Yangzhou225009)Abstract:Thenucleicacidfragmentofporcinecircovirustype2(PCV2)wasamplifiedusingPCRfromthetissuesofadomesticatedwildboarwithsuspectedpostweaningmult
3、isystemicwastingsyndrome(PMWS).ThesampleweretheninoculatedintotheDulaccellsandpassagedfor8generation.The4nucleicacidfragmentscoveredthecompletegenomeforPCV2wereobtainedbyover-lappingPCRandsenttosequence.Thesequenceofgenomewascomparedwithother9strainsoriginatedfrompigletsinthesamearea.Theresult
4、showedthatthesestrainswereinhighhomology.Keywords:Domesticatedwildboar,Porcinecircovirustype2,Isolation,Identification猪圆环病毒2型(porcinecircovirustype2,PCV2)能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postwea-ningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)、猪皮炎与肾病综合征、繁殖障碍等疾病[1]。PMWS是一种以断乳仔猪渐进性消瘦、呼吸困难、腹泻、贫血、明显的淋巴组织病变为主要特征的疾病[1,2]。自199
5、1年在加拿大首次发现PMWS以来,欧美多个国家和日本相继报道了PMWS的发生和流行[3-6],我国首次分离到该病毒是在2001年[7]。随后国内学者们证实该病毒在我国猪场广泛存在并造成了巨大经济损失[8-10]。家猪和野猪被认为是PCV2的自然宿主[1],目前野猪感染发病的报道很少[11,12]。近年来,我国多个地区开始饲养野猪或杂交野猪,随着野猪进入饲养环境中并与家猪接触,其生存的生态和环境发生了变化,与家猪携带的病原体接触频率增高,一些传染病开始出现和流行。本研究对从疑为PMWS的野猪病料中分离到的一株PCV2进行了鉴定。1材料与方法1.1病料和生物材料来自江苏某猪场,病猪死亡
6、前主要表现体温升高、消瘦、呼吸困难等临床症状,剖检取病变的淋巴结、肺和脾脏组织,置于-70°C超低温冰箱中保存备用。Dulac细胞(无PCV1污染)由本室保存。PCV1参考毒株由本室分离保存;PCV2标准毒株由南京农业大学陈溥言教授惠赠。PCV2分离株ChangZhou0511、DaFeng0609、GaoYou0707、HuaiAn0609、SuZhou0511、Taizhou0512、TianChang0603、YangZhou0608和YangZhou0705均由本室分离保存。1.2培养基和试剂DMEM为美国GIBCO公司产品;NCS购自Hyclone公司;TaqDNA聚合酶
7、(含10×Buffer)、dNTP、100bpDNAMarker购自大连TaKaRa生物工程有限公司;蛋白酶K、胰酶购自上海生工生物工程技术服务有限公司;其他试剂均为国产分析纯产品。1.3PCV2特异性引物引物参照文献[13],扩增的PCV2片段为404bp。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司。1.4病料处理取疑似PCV2感染的野猪脾和淋巴结加入含2000U青、链霉素的0.01mol/LpH7.4PBS液研磨,离心取上清液500µL。1.5DNA的提取加入终浓度为
