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时间:2018-11-12
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1、逐淤化痰汤对脑出血大鼠细胞凋亡及Bcl【关键词】逐淤化痰汤脑出血细胞凋亡Bcl-2蛋白Bax蛋白 Abstract:ObjectiveToprobeintotheeffectofedaravoneonthecellapoptosisandtheexpressionofBcl-2andBaxproteinfolloorrhage(ICH)inrats,andexploretheprotectiveeffectofedaravoneonthecerebralinjuryinducedbyhemorrhage.MethodsNiySD
2、ratslydividedinto3groups:Zhuyuhuatanoralliquidgroup,ICHgroupandshamgroup(n=30).TheratmodelofICHeseparatelyneuronalapoptosisandtheexpressionofBcl-2andBaxproteinonitoredbyHoechstandimmunohistochemistry,respectively.ResultsApoptosisandtheexpressionofBcl-2andBaxproteingro
3、up(P<0.01).TreatmentofZhuyuhuatanoralliquidmarkedlyreducedapoptosisahdtheexpressionofBaxproteininparisontotheICHgroup(P<0.05or<0.01),orrhageightberelativetothealleviatedoxidativestress,upregulatedBcl-2proteinanddoorrhage;apoptosis;Bcl-2protein;Baxprotein脑出血(intracereb
4、ralhemorrhage,ICH)是神经系统常见病和多发病。研究表明,细胞凋亡机制参与了脑出血继发性神经细胞损伤[1,2]。现阶段中药方剂在脑出血的治疗中仍然发挥着重要作用,但传统观念认为有引起出血加重危险,故多应用于脑出血恢复期。最新研究表明,脑出血急性期应用逐淤化痰药物疗效更好[3]。逐淤化痰汤(Zhuyuhuatanoralliquid)治疗脑出血疗效确切,一般用于脑出血恢复期。本实验观察大鼠脑出血急性期应用逐淤化痰汤后血肿周围脑组织内细胞凋亡及Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病-2)、Bax蛋白的表达情况,为逐淤化痰汤治疗
5、急性期脑出血提供理论依据。1材料与方法 1.1材料 1.1.1实验动物 健康雄性SD大鼠共90只,体重200~300g,3~4月龄,(由辽宁医学院实验动物中心提供)。 1.1.2药品和试剂 逐淤化痰汤(钩藤、生大黄各15g,水蛭、三七、郁金各10g,红参12g,丹参20g)由锦州医药公司购进,取液250mL按1∶1浓度水煎,于辽宁医学院中药制剂室制成含生药1g/mL,冰箱冷藏备用。Bcl-2,Bax测定试剂盒(购自武汉博士德公司),细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒(购自碧云天生物技术研究所) 1.1.3主要实验仪器
6、 立体定位仪:(美国STOELTING公司),微量进样器(上海安亨微量进样器厂)。 1.2实验方法 1.2.1分组及给药 随机分为假手术组、脑出血模型(ICH)组及逐淤化痰汤治疗组,每组30只。每组又分为术后1、2、3、5、7d,5个时间点,每个时间点各6只。逐淤化痰汤治疗组于造模后6h开始灌喂给药,用量为每次1g/kg,2次/日(用量相当于70kg人相同体表面积用量的3倍)。脑出血组:造模后1d开始灌喂等量生理盐水,2次/日。假手术组:除不注入自体血外,其余条件同ICH组。 1.2.2脑出血模型的制备 参照Xue[4]
7、和Yang[5]方法将大鼠称重后给予10%水合氯醛(3.3mL/kg)腹腔注射麻醉,大鼠俯卧位,头部固定在脑立体定位仪上。脑立体定位仪定位大鼠右侧尾状核(前囟后0.2mm,矢状缝向右旁开3.0mm,深度6.0mm)[6];切开顶部中线皮肤,以前囟后0.2mm,中线右侧旁开3mm处,在颅骨表面钻孔,将微量注射器调整至钻孔处。取血前将鼠尾放在40℃温水中5min,消毒后距末端0.5cm处剪断,让鼠尾血自然滴下取血,用微量注射器取大鼠自体不凝血50μL,在立体定位仪引导下向尾状核注入自体不凝血;缓慢进针6mm,以25μL/min速度2m
8、in内注入50μL血液;留针10min,缓慢出针,用骨蜡封闭颅骨上的钻孔,缝合皮肤。以上均按无菌操作原则进行。假手术组除不注血外,其余操作同ICH组。 1.2.3取材 各组大鼠分别按实验设计于造模后1、2、3、5、7d取材。每组动物每个时间点各
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