白藜芦醇对人外周血单核-巨噬细胞ccr5表达的影响

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1、白藜芦醇对人外周血单核/巨噬细胞CCR5表达的影响【摘要】目的：观察白藜芦醇对人外周血单核/巨噬细胞CC型趋化因子受体5(CCR5)表达的调节作用。方法：采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，再经贴壁法纯化单核/巨噬细胞。采用IFN-γ（1×105U/L)诱导单核/巨噬细胞表达CCR5，再分别加入不同浓度的白藜芦醇(0.5，5，25，50和100μmol/L)进行干预。培养24h后收集细胞，RT-PCR法检测外周血单核/巨噬细胞CCR5mRNA表达水平；流式检测单核/巨噬细胞CCR5表达阳性率。同时将CCR5荧光素酶报告基因（pGL3-Basic-CCR5）转染

2、各组细胞，检测各转染组的荧光素酶相对活性。结果：中、高浓度白藜芦醇处理组（25,50和100μmol/L）的CCR5mRNA表达水平、CCR5阳性细胞率和CCR5-luc报告基因的荧光素酶相对活性比对照组均有所降低，低浓度白藜芦醇处理（0.5和5μmol/L）对单核/巨噬细胞CCR5的表达无明显影响。结论：中、高浓度白藜芦醇可抑制外周血单核/巨噬细胞CCR5的表达。【关键词】白藜芦醇；单核/巨噬细胞；巨噬细胞移动抑制因子；报告基因；趋化因子受体　　［Abstract］Objective:Tostudyregulatingeffortsofresveratrolontheexpressionof

3、CC-chemokinereceptor-5(CCR5)inhumanperipheralmonocyte/macrophage.Methods：MononuclearcellshumanperipheralbloodbythemethodofFicoll-Hypaquedensitygradientcentrifugation.MacrophagesediumtoinducethecellsexpressingCCR5.DifferentconcentrationofRES(0.5，5,25,50and100μmol/L)etime.Monocyte/macrophageRNAetry.CC

4、R5reportgeneentionedabove,therelativeluciferaseactivityofCR5reportgeneol/L）treatedgroupparedol/Ltreatedgroup.Conclusion：MidstandhighconcentrationofresveratrolhavetheeffortstoinhibittheexpressionofCCR5inhumanperipheralmonocyte/macrophage.　　［Keyonocyte；macrophage；CCR5；reportgene;chemokinereceptor　　白藜芦

5、醇(Resveratrol,RES,3,5,4′-三羟基-均二苯代乙烯)是一种主要由葡萄属植物产生的成分，具有广泛的药理功能，如抗菌消炎、诱导肿瘤细胞凋亡、清除自由基、抗氧化、抗衰老、保肝、保护心血管、内分泌调节和免疫调节等［1］。2004年Krishnan等［2］首先报道了白藜芦醇的抗HIV-1作用，发现白藜芦醇可诱导处于感染潜伏期的HIV-1基因表达病毒抗原，从而刺激机体免疫系统的抗病毒作用［2］。2006年杨子峰等［3］利用感染HIV的小鼠模型证实了白藜芦醇的抗HIV作用。目前白藜芦醇的抗HIV作用越来越引起了人们的重视，但是对于白藜芦醇的抗HIV机制尚不清楚。众所周知CC型趋化因子受体

6、5（CC-chemokinereceptor-5,CCR5）在HIV-1病毒感染单核/巨噬细胞的过程中起到了非常重要的作用，CCR5与HIV-1的gp120结合后可以促进HIV-1病毒进入细胞，有很多抗HIV-1药物的靶位点正是CCR5［4］，我们推测白藜芦醇可能是通过下调单核/巨噬细胞CCR5的表达，从而起到抗HIV-1病毒作用。若果真如此,这将对揭示白藜芦醇的抗病毒机制起到非常重要的作用，也将为白藜芦醇抗HIV-1的药用价值提供重要的基础理论依据。　　1材料和方法　　1.1材料　　健康人外周血（新乡医学院第一附属医院）；白藜芦醇(Sigma)；DMSO(Sigma)；IFN-γ（Sigma

7、）；淋巴细胞分离液（上海生工）；lipofectamine2000Reagent(Promega)；RES-荧光素酶报告基因（pGL3-Basic-CCR5，含有CCR5启动子-416bp～+61bp)由日本Nagasaki大学Moriuchi博士惠赠；pGL3-Basic(Promega）；pGL3-Control(Promega)；荧光素酶报告基因检测试剂盒（Promega）；RT-PCR试剂