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时间:2018-11-02
《白藜芦醇对人外周血单核-巨噬细胞ccr5表达的影》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、白藜芦醇对人外周血单核/巨噬细胞CCR5表达的影【摘要】目的:观察白藜芦醇对人外周血单核/巨噬细胞CC型趋化因子受体5(CCR5)表达的调节作用。方法:采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,再经贴壁法纯化单核/巨噬细胞。采用IFN-γ(1×105U/L)诱导单核/巨噬细胞表达CCR5,再分别加入不同浓度的白藜芦醇(0.5,5,25,50和100μmol/L)进行干预。培养24h后收集细胞,RT-PCR法检测外周血单核/巨噬细胞CCR5mRNA表达水平;流式检测单核/巨噬细胞CCR5表达阳性率。同时将CCR5荧光素酶报告基因(pGL3-Ba
2、sic-CCR5)转染各组细胞,检测各转染组的荧光素酶相对活性。结果:中、高浓度白藜芦醇处理组(25,50和100μmol/L)的CCR5mRNA表达水平、CCR5阳性细胞率和CCR5-luc报告基因的荧光素酶相对活性比对照组均有所降低,低浓度白藜芦醇处理(0.5和5μmol/L)对单核/巨噬细胞CCR5的表达无明显影响。结论:中、高浓度白藜芦醇可抑制外周血单核/巨噬细胞CCR5的表达。【关键词】白藜芦醇;单核/巨噬细胞;巨噬细胞移动抑制因子;报告基因;趋化因子受体 [Abstract]Objective:Tostudyregulatingeffortsofresve
3、ratrolontheexpressionofCC-chemokinereceptor-5(CCR5)inhumanperipheralmonocyte/macrophage.Methods:MononuclearcellshumanperipheralbloodbythemethodofFicoll-Hypaquedensitygradientcentrifugation.MacrophagesediumtoinducethecellsexpressingCCR5.DifferentconcentrationofRES(0.5,5,25,50and100μmol/L)
4、etime.Monocyte/macrophageRNAetry.CCR5reportgeneentionedabove,therelativeluciferaseactivityofCR5reportgeneol/L)treatedgroupparedol/Ltreatedgroup.Conclusion:MidstandhighconcentrationofresveratrolhavetheeffortstoinhibittheexpressionofCCR5inhumanperipheralmonocyte/macrophage. [Keyonocyte;ma
5、crophage;CCR5;reportgene;chemokinereceptor 白藜芦醇(Resveratrol,RES,3,5,4′-三羟基-均二苯代乙烯)是一种主要由葡萄属植物产生的成分,具有广泛的药理功能,如抗菌消炎、诱导肿瘤细胞凋亡、清除自由基、抗氧化、抗衰老、保肝、保护心血管、内分泌调节和免疫调节等[1]。2004年Krishnan等[2]首先报道了白藜芦醇的抗HIV-1作用,发现白藜芦醇可诱导处于感染潜伏期的HIV-1基因表达病毒抗原,从而刺激机体免疫系统的抗病毒作用[2]。2006年杨子峰等[3]利用感染HIV的小鼠模型证实了白藜芦醇的抗HIV作用
6、。目前白藜芦醇的抗HIV作用越来越引起了人们的重视,但是对于白藜芦醇的抗HIV机制尚不清楚。众所周知CC型趋化因子受体5(CC-chemokinereceptor-5,CCR5)在HIV-1病毒感染单核/巨噬细胞的过程中起到了非常重要的作用,CCR5与HIV-1的gp120结合后可以促进HIV-1病毒进入细胞,有很多抗HIV-1药物的靶位点正是CCR5[4],我们推测白藜芦醇可能是通过下调单核/巨噬细胞CCR5的表达,从而起到抗HIV-1病毒作用。若果真如此,这将对揭示白藜芦醇的抗病毒机制起到非常重要的作用,也将为白藜芦醇抗HIV-1的药用价值提供重要的基础理论依据。
7、 1材料和方法 1.1材料 健康人外周血(新乡医学院第一附属医院);白藜芦醇(Sigma);DMSO(Sigma);IFN-γ(Sigma);淋巴细胞分离液(上海生工);lipofectamine2000Reagent(Promega);RES-荧光素酶报告基因(pGL3-Basic-CCR5,含有CCR5启动子-416bp~+61bp)由日本Nagasaki大学Moriuchi博士惠赠;pGL3-Basic(Promega);pGL3-Control(Promega);荧光素酶报告基因检测试剂盒(Promega);RT-PCR试剂盒
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