反相高效液相色谱法测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄

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1、反相高效液相色谱法测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄【摘要】目的：以陕西洛南产北细辛为研究对象，采用反相高效液相色谱法测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄樟醚含量，以满足质量控制的要求.方法：以甲醇水（80∶20）为流动相，流速1mL/min,经InertsilODS3(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱分离，于250nm波长检测.结果：甲基丁香酚及黄樟醚的分离效果良好.甲基丁香酚在19.28~462.72mg/L浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=46156.59X+32840.02（r=0.9999，n=5）；黄樟醚在11.78~471.20mg/L

2、浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=29591.52X-75017.20（r=0.9999，n=5）.甲基丁香酚和黄樟醚的平均回收率分别为99.95%和100.03%，相对标准偏差分别为0.97%和0.68%.结论：本法可同时测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄樟醚的含量，为质量控制提供依据，方法简便、快速，准确.【关键词】反相高效液相色谱细辛挥发油甲基丁香酚黄樟醚　　0引言　　细辛主要有效成分为挥发油，甲基丁香酚和黄樟醚是挥发油中的主要成分.甲基丁香酚有麻醉和镇痛作用，黄樟醚为广谱抗霉菌成分.但文献报道［1-2］，两者的代谢产物均可引起大鼠的癌变.为了控制

3、细辛挥发油的质量，我们以陕西洛南产北细辛为研究对象，建立了HPLC法同时测定细辛挥发油中甲基丁香酚和黄樟醚的含量.该法简便快速，结果准确可靠.　　1材料和方法　　1.1材料SHIMADZULC2010ATH高效液相色谱仪及其色谱工作站；挥发油提取器（容量2L，西安远志公贸有限责任公司）；电子分析天平(梅特勒公司)；北细辛（购于陕西西安市药材公司，产地陕西洛南）；甲基丁香酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130555200501）；黄樟醚对照品（四川宜宾香料厂，含量：98.8%）；甲醇（色谱纯，Fisher公司），色谱用水为双蒸水.　　1.2方法　　1

4、.2.1色谱条件色谱柱：IinertsilODS3(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇水（80∶20）；流速：1mL/min；检测波长：250nm，进样量：20μL，温度：室温.　　1.2.2对照品储备液及供试品溶液的制备精密称量甲基丁香酚对照品约19.28mg，黄樟醚对照品23.56mg，分别置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液，避光保存备用.精密量取细辛挥发油100.05mg置25mL的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL置10mL的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液.　　2结果　　2.1甲

5、基丁香酚及黄樟醚含量测定方法建立　　2.1.1方法专属性分别取适当浓度的甲基丁香酚对照品溶液、黄樟醚对照品溶液、供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样，记录色谱图（图1）.从图中可以看出甲基丁香酚的保留时间为7.55min，黄樟醚的保留时间为11.65min，其他组分对测定无干扰.　　A：甲基丁香酚对照品；B：黄樟醚对照品；C：细辛挥发油甲醇溶液.　　图1色谱图（略）　　2.1.2标准曲线制备与线性考察精密量取甲基丁香酚对照品储备液0.25，0.5，1，3和6mL，分别置于10mL的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀.分别吸取上述溶液20μL注入液相色谱仪，记录峰面积

6、，以峰面积Y对浓度X作图，甲基丁香酚峰面积在19.28~462.72mg/L浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=46156.59X+32840.02(r=0.9999，n=5).精密量取黄樟醚对照品储备液0.125，0.25，0.5，1，3和5mL，分别置10mL的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀.分别吸取上述溶液20μL进样，记录峰面积，以峰面积Y对浓度X作图，黄樟醚峰面积在11.78~471.20mg/L浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=29591.52X-75017.20(r=0.9999，n=5).　　2.1.3精密度考察取混合对照品

7、溶液（含甲基丁香酚77.12mg/L，黄樟醚94.24mg/L）同一天连续进样5次，进样量20μL，测定峰面积，计算甲基丁香酚黄和樟醚的1d内RSD值分别为0.22%，0.28%.连续3d进样5次，进样量20μL，测定峰面积，计算甲基丁香酚黄和樟醚的3d间RSD值分别为0.26%，0.34%.结果表明仪器与色谱条件具有良好的精密度.　　2.1.4稳定性试验取供试品溶液，在配制后0，4，8和24h于同一色谱条件下分别进样，甲基丁香酚、黄樟醚峰面积的RSD分别为0.32%，0.41%.结果表明样品溶液在室温下24h内稳定.　　2.1.5回收率实验精密称量同一批(批

8、号20070912)已知含量的挥发油1