马氏珠母贝多糖的硫酸酯化修饰及其细胞免疫调节活性的初步研究

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1、主要缩略词及其含义Explanationofmainabbreviatedwords缩略词英文全称PMPSPinctadaMartensiipolysaccharidesDSDegreeofsubstituteHPLCHighperformanceliquidchromatographyIRInfraredspectometryUVUltraVioletspectometryNMRNuclearmagneticresonanceTBTrypanBlueNRNeutralRedMTTMethylthiazolyltetrazoliumConAConc

2、anavalinALPSLipopolysaccharidePBSPhosphate—bufferedSalineDMSODimethylsulfoxideRevolutionsperminute中文全称马氏珠母贝多糖取代度高效液相色谱红外光谱紫外光谱核磁共振波谱台盼蓝中性红四甲基偶氮唑盐刀豆蛋白A脂多糖磷酸盐缓冲液二甲基亚砜转／分钟广东海洋大学硕士学位论文1绪论1．1文献综述1．1．1马氏珠母贝(全脏器)的开发现状马氏珠母巧1(PinctadaMartensii)又名合浦珠母贝，是我国人工培育南珠养殖最广、数量最大的主要贝种，其所产的珍珠为软体动

3、物门拟瓣鳃纲翼形亚纲珍珠贝目珍珠贝科马氏珠母贝属[1]。马氏珠母贝主要分布在广东、广西、海南沿海，同本也部分有分布【2J。珠农在采珠后，所剩的珠母贝全脏器资源量可达3500—4000吨／年，且价格低廉f3—4元／公斤)[31。有研究表吲4。5]，珠母贝全脏器营养丰富，富含蛋白质，其中牛磺酸含量较为丰富；其还富含钙、锌、铁、硒等矿物质元素及多不饱和脂肪酸，可以看出珠母贝肉具有很大的丌发利用价值。目前我国把珠母贝作为主要养殖的品种，预计将会有更大的产量。这些珠母贝全脏器除少数食用外，其余大部分资源用作饲料、饵料而未能充分利用该资源的有用价值，从而浪费大

4、量的珠母贝肉。因此，珠母贝全脏器应该开发和利用。1．1．2马氏珠母贝的活性研究马氏珠母贝的药用价值很高。有报道，珠母贝肉可以有效治疗乙肝【6J和病毒性肝炎‘71。珠母贝肉提取物[8]能够提高老年小鼠记忆力，增强小鼠免疫力的作用。吴红棉等[9‘101体外评价珠母贝糖胺聚糖的抗肿瘤活性，结果发现，糖胺聚糖抗肿瘤作用机理是通过诱导肿瘤细胞死亡及增强机体免疫功能等综合作用的结果。另有研究表明[111，珠母贝多糖肽具有提高珠母贝非特异性免疫力。1．1．3多糖的研究进展糖按照结构单元分为单糖、二糖、低聚糖和多糖，是一种多羟基酮或醛类化合物。多糖由几百个乃至几万

5、个单糖分子以糖苷键连接而成的糖链，是一类重要的生化物质。其中葡聚糖较为常见，它是一类由葡萄糖聚合而成的高分子化合物。葡聚糖因构型不同分为0【型和p型，其中p型葡聚糖一般由p．1_4一D和p．1_6一D等葡聚糖组成。研究表明，0【型葡聚糖是提供生物机体的主要能量，而少有研究表明其具有增强免疫活性等方面的报道；B型葡聚糖一般具有免疫调节、抗病毒、抗肿瘤、抗福射等生物学功能，成为近些年来免疫药理学研究的焦点。1．1．3．1珠母贝多糖的提取、分离纯化提取是利用极性相似相溶原理将多糖化合物从生物物体里分离开来的过程。一般提取就是先经酶解法去除蛋白质等大分子物

6、质，再经乙醇等有机溶剂溶解沉淀得到多糖物质。在醇沉过程中，一些色素、大分子蛋白及有机盐等杂质会随着多糖从有机溶剂一起醇沉下来，因此，醇沉所得物质只是粗多糖。如范秀萍等【l2】先用酶解马氏珠母贝多糖的硫酸酯化修饰及其细胞免疫调节活性的初步研究醇沉法从菲律宾蛤仔全脏器中提取氨基多糖粗品，再用吸附、透析、CTAB络合等方法进一步纯化氨基多糖粗品，进而得到氨基多糖纯化品。酶解、醇沉得到的多糖提取物中含有一些无机盐、醇不溶性的低分子物质及蛋白质残基等杂质，而且动植物组织中会包含多种多糖，因此要获得均一性多糖，需要综合多种方法对粗多糖进一步的除杂，分离纯化。目

7、前多糖分离纯化的主要方法有季铵盐沉淀法、亲和层析法、离子交换色谱法、纤维素阴离子交换柱层析法、凝胶过滤法、凝胶柱层析法【l3J等。其中柱层析法是国内外分离纯化多糖的常用方法，主要有离子交换柱层析法和凝胶柱层析法，该方法具有分离效率高、操作方便、被分离物质不易变性、条件温和等优点。离子交换层析是基于待分离物质的电荷性质及含量的不同，与填料和洗脱剂相互作用产生速度差，最终使其分离丌来。如DEAE一纤维素和DEAE一葡聚糖可以用来分离各种中性多糖、酸性多糖和粘多糖。凝胶柱层析法是根据凝胶层析介质的不同网状孔径，进而利用糖的分子量不同来达到分离，因此该法可

8、快速有效的分离不同分子量的糖类及其衍生物[14-151。目前有大量关于柱层析法分离纯化多糖的文献报道，马明华等[16】则利