细胞外调节蛋白激酶介导的脂蛋白（a）促血管平滑肌

《细胞外调节蛋白激酶介导的脂蛋白（a）促血管平滑肌》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、细胞外调节蛋白激酶介导的脂蛋白（a）促血管平滑肌【摘要】目的：研究细胞外调节蛋白激酶(extracellularregulatedproteinkinases，ERK)在脂蛋白(a)[Lp(a)]诱导的人血管平滑肌细胞(VSMC)迁移及细胞骨架构建中的作用。方法：用不同浓度的ERK激酶抑制剂PD98059抑制人VSMC内ERK的活化，再用Lp(a)诱导处理后的细胞，C迁移数量的变化。结果：C，Lp(a)诱导20min后，细胞内未见明显的张力纤维、粘着斑及丝状伪足。对照组VSMC迁移细胞数为(78.87±7.43)个，PD98059处理组为(49.20±6.

2、47)个，PD98059处理组较正常对照组明显减少（P<0.01）。结论：Lp(a)诱导的VSMC细胞骨架构建及细胞迁移依赖于ERK的活化。【关键词】脂蛋白(A)；平滑肌细胞；血管；蛋白激酶类；细胞外调节蛋白激酶［Abstract］Objective:Tostudytheeffectofextracellularregulatedproteinkinases(ERK)incytoskeletonreorganizationandmigrationofhumanvascularsmoothmusclecells(VSMCs)stimulatedbyli

3、poproteina[Lp(a)].Methods:TheVSMCstreatedulatedbyLp(a)for20minutes.TheexpressionofproteinERK(P-ERK)inVSMCsicroscope,andthenumberofcellsmigratedinedigrationassays.Results:NochangeofP-ERKexpressionol/L（P>0.05）.Ccdecreasedalongol/LofPD98059group.Nofilopodia,stressfibersorfocaladhe

4、sionsberofmigratingcellsinVSMCsofPD98059treatedgroups(49.20±6.47)allerthanthatofcontrolgroup(78.87±7.43)significantly（P<0.01）.Conclusion:Lp(a)stimulatedcytoskeletonreorganizationandcellmigrationinVSMCsisdependentontheactivationofERK.［Keyoothmusclecells;bloodvessels;proteinkinas

5、es;extracellularregulatedproteinkinases　　目前已知血浆脂蛋白(a)[Lp(a)]浓度的升高是各种动脉硬化性疾病的危险因素，Lp(a)不仅与其发病有关，还与其严重程度、术后血管再狭窄及闭塞有很大的相关性。Lp(a)的血浆浓度对生活方式改变和药物的调控不敏感，故目前对Lp(a)致病机制的研究已成为研究的热点。现已发现Lp(a)可促进血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移，但其具体机制仍不明确。用ERK激酶抑制剂PD98059抑制人VSMC内的细胞外调节蛋白激酶(extracellularregulatedproteinkina

6、ses，ERK)活化，探讨ERK在Lp(a)促VSMC迁移中的作用。1材料与方法1.1材料Lp(a)，FITC标记的Phalloidin，鼠抗人平滑肌α-肌动蛋白（α-actin）单克隆抗体，DAPI购自美国Sigma公司；免疫组织化学染色（SABC）试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；CostarTrans公司。1.2方法1.2.1人脐动脉VSMC的原代培养、纯化、传代及鉴定取剖宫产胎儿的新鲜脐带，分离出脐动脉，剥除脐动脉外膜，刮去内膜，将动脉中膜剪成约1mm×1mm×1mm的组织块进行培养。传代过程中采用差速贴壁法进一步纯化细胞，第5~10代细胞用于

7、实验［1］。倒置相差显微镜下观察细胞形态，进行形态学鉴定。SABC法检测VSMC胞浆内的α-actin。1.2.2抑制剂阻断Lp(a)诱导的ERK活化1.2.2.1实验分组取第5~10代细胞，用不含或含Lp(a)[即为1、2组，Lp(a)终浓度为320mg/L]培养液诱导6h；用含PD98059（终浓度分别为10、20、30、40及50μmol/L，依次为3~7组）的培养液预处理1h后，再用含Lp(a)(终浓度为320mg/L)培养液诱导6h。1.2.2.2C加入不含或含PD98059（终浓度为40μmol/L）培养液孵育1h后，予Lp(a)诱导20min

8、，免疫荧光标记细胞骨架，激光共聚焦显微镜观察细胞骨架构建。1.2.