猪巨细胞病毒感染猪多器官microRNA表达谱的研究

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1、分类号Ｓ８５２．６５＋９．１学号Ｂ２０１２１９Ｏ３？，＊■ｌ－；Ｖ：／．．Ｖ－－．．、．．．＾１？ＪＣ．Ｖ－＇？＇＇＊？■■－．，ｆＡｉＳＩＣＨＵＡＮＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ＇１＊＊．？＞ｒ？－Ｖ：：＿．博士学位论文猪巨细胞病毒感染猪多器官ｍｉｃｒｏＲＮＡ表达谱的研究‘ｉ刘骁指导教师徐志文教授＾．专业名称预防養医、＇１Ｔ：．＂＇■？＊＇－？＼？．

2、．－，ｆ，－－．ｉ．．，，．－？＼．．，＂？Ｗ＇－－■？．．．．，＿研究方向动物传染病病原分子生物学ｒ＿：多论文独匍性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它一教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表

3、示了谢意。’又？Ｍ年？研究生签名？减月丫曰关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定：，即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅，可以采用、缩印或扫描等复制手段保存。影印、汇编学位论文同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。以本论文不保密。□本论文保密，在＿年解密后适用本授权。“”（请在以上□内划Ｖ）研究生签名：％一年Ｍ月ｑ日导师签名：年月日猪巨细胞病窶感染猪多器官

4、ｍｉｃｒｏＲＮＡ表达谱的研究中文摘要猪巨细胞病毒（Ｐｏｒｃｉｎｅｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＰＣＭＶ）属于巨细胞病毒属，疱疹病毒科，ｐ疱ｙ疹病毒亚科。猪巨细胞病毒具有二十面体结构并具有双链线状ＤＮＡ基因组。ＰＣＭＶ已经在世界各地广泛流行，包括中国、英国、德国、美国、日本在内的国家都己证实了ＰＣＭＶ一。的流行，并对养殖业造成严重威胁ＰＣＭＶ是种免疫抑制病毒，主要抑制Ｔ淋巴细胞及巨噬细胞系统免疫功能，但其对免疫系统抑制的机制并不明确。为了研究ＰＣＭＶ对宿主免疫器官功能的潜在影响，我们使用转录组芯

5、片技术对ＰＣＭＶ感染的重要猪中枢免疫器官胸腺的转录物组进行了检测，并使用健康猪胸腺作为对照。本研究结果表明，相对正常猪胸腺ＰＣＭＶ感染的胸腺中５５８２种基因发生显著差异性表达，其中２１６１种基因表达显著上调，而３４２１种基因表达显著下调。本研究使用ＰＣＲ对１３种显实时荧光定量著差异性表达的免疫相关基因进行了检测，并使用一Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｔｌｏ技术进步对这些基因表达的蛋白进行了验证。对ＰＣＭＶ感染胸腺中差异性表达基因的基因功能注释分析（Ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏａｎａｌｙｓｉｓ、基因调控网络分析Ｇｅｎｅｇｙ

6、）（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｎｅｔｗｏｒｋａｎａｌｙｓｉｓ、及ＫＥＧＧ通路分析结果均表明，ＰＣＭＶ感染广泛影响包括）－免疫系统、ＴＧＦＴＮＦ－ａ信号通路在内、细胞代谢过程Ｐ信号通路、淋巴受体信号通路、的大量免疫相关信号通路。一ＭｉｃｒｏＲＮＡｍＲＮＡ１－２４ｔＲＮＡ。ｉ是种在真核生物中广泛存在的长度为８ｎ的非编码（）而成熟ｍｉＲＮＡｓ对发育、造血作用、细胞分化、细胞凋亡、增殖、脂肪代谢、癌症、信号转导等诸多生命过程都发挥着重要调控作用。为了研究ｍｉＲＮＡ在ＰＣＭＶ感染免疫抑制过程中发挥的调控功能，本

7、研究利用Ｉｌｌｕｍｉｎａ／Ｓｏｌｅｘａ技术对感染ＰＣＭＶ的猪肺脏、肝脏、胸腺、肾脏、脾脏及健康猪对应器官进行高通量测序，并对ｍｉＲＮＡ。、、ＲＮＡ表达谱进行了综合分析测序结果显示，胸腺、肺脏肾脏脾脏及肝脏ｍｉ表达谱中共发现６０１种成熟ｍＲＮＡｓ２９５ｉ表达，其中有种为未录入ｍｉＲＮＡ数据库的新ｍｉＲＮＡｓ。本ＰＣＭＶ感ｍＮＡ研究从染的多种器官和多种正常器官ｉＲ高通量测序表达谱－－中挑选１２种ｍｉＲＮＡｓ使用ＳｔｅｍｌｏｏＲＴＰＣＲ检测手段对其表达进行验证，结果显示￥ｐｑ一１２种指定ｍｉＲＮＡ高通量测序与

8、荧光定量ＰＣＲ检测结果基本致。基因功能注释分析（ＧｅｎｅＯｎｔｏｌｏｇｙ，ＧＯ）结果表明ＰＣＭＶ感染器官中显著差异性表达的ｍｉＲＮＡｓ靶基因功能均集中于免疫系统过程（ｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍｐｒｏｃｅｓｓ、细胞过程（ｃｅｌｌｕｌａｒｒ