瑞安市副溶血性弧菌临床分离株的血清分型和毒力基因研究

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1、瑞安市副溶血性弧菌临床分离株的血清分型和毒力基因研究摘要：目的：了解瑞安市副溶血性弧菌临床分离株的血清型和毒力基因携带情况。方法：按照国标GB4789.7-2013进行血清分型，用PCR方法检测其tdh和trh毒力基因。结果：52株副溶血性弧菌的O血清型，以03(42.30%)、04(30.77%)、01(11.54%)为主，28株K型不能分型；41株菌株tdh+trh-，4株tdh-trh+，1株tdh+trh+，6株tdh-trh-;所有trh+菌株尿素酶试验阳性。结论：瑞安地区副溶血性弧菌临床分离株中03:K6为最主要的流行血清型，04:KUT次之；大部

2、分菌株携带tdh毒力基因。关键词：副溶血性弧菌；毒力基因；尿素酶；血清分型副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus，Vp)是一种广泛分布于近海岸的海水、海底泥沙、浮游生物和海产品中的一种嗜盐性弧它是引起我国沿海地区食物中毒的重要致病耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH)是目前公认的副溶血性弧菌主要的毒力因子，与其致病能力密切相关［1］瑞安市副溶血性弧菌临床分离株的血清分型和毒力基因研究摘要：目的：了解瑞安市副溶血性弧菌临床分离株的血清型和毒力基因携带情况。方法：按照国标GB4789.7-2013进行血清分型，用PCR方法检测其t

3、dh和trh毒力基因。结果：52株副溶血性弧菌的O血清型，以03(42.30%)、04(30.77%)、01(11.54%)为主，28株K型不能分型；41株菌株tdh+trh-，4株tdh-trh+，1株tdh+trh+，6株tdh-trh-;所有trh+菌株尿素酶试验阳性。结论：瑞安地区副溶血性弧菌临床分离株中03:K6为最主要的流行血清型，04:KUT次之；大部分菌株携带tdh毒力基因。关键词：副溶血性弧菌；毒力基因；尿素酶；血清分型副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus，Vp)是一种广泛分布于近海岸的海水、海底泥沙、浮游生物和海产品中

4、的一种嗜盐性弧它是引起我国沿海地区食物中毒的重要致病耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH)是目前公认的副溶血性弧菌主要的毒力因子，与其致病能力密切相关［1］瑞安市副溶血性弧菌临床分离株的血清分型和毒力基因研究摘要：目的：了解瑞安市副溶血性弧菌临床分离株的血清型和毒力基因携带情况。方法：按照国标GB4789.7-2013进行血清分型，用PCR方法检测其tdh和trh毒力基因。结果：52株副溶血性弧菌的O血清型，以03(42.30%)、04(30.77%)、01(11.54%)为主，28株K型不能分型；41株菌株tdh+trh-，4株tdh-trh+

5、，1株tdh+trh+，6株tdh-trh-;所有trh+菌株尿素酶试验阳性。结论：瑞安地区副溶血性弧菌临床分离株中03:K6为最主要的流行血清型，04:KUT次之；大部分菌株携带tdh毒力基因。关键词：副溶血性弧菌；毒力基因；尿素酶；血清分型副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus，Vp)是一种广泛分布于近海岸的海水、海底泥沙、浮游生物和海产品中的一种嗜盐性弧它是引起我国沿海地区食物中毒的重要致病耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH)是目前公认的副溶血性弧菌主要的毒力因子，与其致病能力密切相关［1］。本文对分离至腹泻病人的副溶

6、血性弧菌临床分离株进行血清学分型，并将TDH毒力基因（tdh）和TRH毒力基因（trh）进行PCR检测，分析毒力基因在临床分离株中的携带分布情况。1材料与方法1.1材料1.1.1菌株2013年至2014年本实验室从临床腹泻病人肛拭子分离到的副溶血性弧菌，共52株。1.1.2主要试剂尿素酶培养基购自北京陆桥技术股份有限公司。副溶血性弧菌O诊断血清及K诊断血清购自日本生研株式会社。PCR引物合成和相关试剂购自生工生物工程（上海）股份有限公司。引物序列见表1。1.2方法1.2.1尿素酶试验将待测菌株接种于尿素培养基，37°C培养24小时。培养基颜色变为玫红色，则为阳

7、性反应，不变色则为阴性。1.2.2副溶血性弧菌血清分型参照GB4789.7-2013进行［2］。1.2.3副溶血性弧菌毒力基因分析1.2.3.1模板DNA制备：用接种环挑取1-2环纯培养物于150ul无菌纯水中混匀，100°C煮沸10分钟，12000r/min离心lOmin,取上清液保存于-20°C备用。1.2.3.2PCR反应体系：2XPCR预混体系25ul,20umol/L上下游引物各1ul,双蒸水21ul，模板2ul,终体系为50Pl。扩增条件为94°C预变性5min，然后按94°C变性lmin，55°C退火1min(tl基因为58°C),72°C延伸l

8、min，循环30次，最终72°C延伸5