igf1 对体外兔关节软骨细胞的生物学效应

《igf1 对体外兔关节软骨细胞的生物学效应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、IGF1对体外兔关节软骨细胞的生物学效应【关键词】细胞培养关键词:关节/细胞学软骨细胞;细胞培养;胰岛素样生长因子-1;细胞周期摘要:目的了解胰岛素样生长因子-1（IGF1）对体外生长的兔关节软骨细胞的生物学效应，为组织工程构件软骨提供理论基础.方法取第3代兔关节软骨细胞体外单层培养，培养液DMEM中以终浓度分别为1，10，100μgL-1的IGF1各作用细胞2，4及6d，以MTT法检测细胞的增殖情况，并在100μgL-1IGF1作用下，采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析.同时，检测基质中糖醛酸的变化反映蛋白多糖含量的变化.结果结果显示在1～100μgL-1浓度下IG

2、F1能明显促进培养软骨细胞的增殖，且以100μgL-1作用4d刺激效果最明显;并能显著影响细胞外基质中糖醛酸的含量.结论IGF1对培养软骨细胞以剂量时间依赖性方式刺激其增殖及功能代谢.　　Keyetabolismofarticularchondrocytesandtheirmatrix.METHODSMonolayercellsof3-genera-tionobtainedfrom4-and1to100μgL-1over2d，4dand6dperiods.EffectofIGF1easuredbyMTTmethodand　theglucuronicacidcontent，

3、ulatecellproliferationandmatrixmetabolisminadose-andtime-dependentmanner.Themaximaleffectofstimilationoccurredat100μgL-1ent.CONCLUSIONCellprolifera-tionandmatrixmetabolismintheculturedarticularchondro-cytescanbestimulatedbyIGF1.　　0引言　　胰岛素样生长因子-1（insulin-likegroin，Hanks液冲洗.再将软骨片切成0.1cm×0.5

4、cm×0.5cm的小粒，分别经2.5gL-1胰蛋白酶、2gL-1胶原酶（上海浦东生化试剂厂），于37℃消化30及60min，用含100mLL-1小牛血清（杭州四季青生物工程材料研究所）的DMEM（USAGibco公司）终止消化后，过滤除碎块，滤液经1500rmin-1离心3min收集细胞.用培养液洗1次，再用培养液悬浮细胞，将细胞密度调至3×105个mL-1，接种于培养瓶中于37℃恒温，50mLL-1CO2浓度，饱和湿度中培养箱（USANuair公司）培养.培养液由DMEM培养基加100mLL-1小牛血清、青链霉素各100umL-1组成.原代细胞贴壁并融合成单层细胞后，传

5、代培养.　　1.2IGF1对兔关节软骨细胞增殖的影响　　1.2.1四唑盐法检测IGF1对细胞增殖的影响取生长良好的第3代软骨细胞，按每孔2×103个细胞100μL分别接种6块96孔培养板（USAFilcon公司），置于培养箱.培养24h，每块培养板按10孔为一个浓度组，分别换入含生长因子的DMEM培养基，使IGF1（华美生物工程公司）的最终浓度分别为1，10，100μgL-1，另10孔仍换原培养液.再培养2，4，6d后，以四唑盐（MTT）（USASigma公司）比色法测细胞相对数（A值），计算每种因子浓度组光吸收值的平均值，行统计学处理.　　1.2.2应用流式细胞仪对IG

6、F1作用于软骨细胞的周期进行分析取4代生长状态良好的软骨细胞6瓶，用2.5gL-1胰蛋白酶消化制成5×105mL-1的细胞悬液，传至200mL大培养瓶共10瓶，每瓶加4mL.培养24h后，向培养瓶内加入IGF1使最终浓度分别为100μgL-1，再继续培养48h.收集细胞，常规样本制备，行流式细胞仪细胞DNA周期测定.　　1.3IGF1对软骨细胞基质中葡萄糖酸含量的影响第3代软骨细胞按3×105/瓶接种到25cm2方形培养瓶中，各瓶细胞随机分为13组，每组4瓶，除对照组及加因子前外对照组不加因子外，其它组于24h后换入不同浓度IGF1，分别作用2，4，6d，每2d换培养液1

7、次，并相应添加因子.终止培养时收获细胞，收集细胞周围基质，用咔唑硫酸法［3］测基质中糖醛酸含量.　　统计学处理:检测数据用F检验及t检验.　　2结果　　2.1细胞形态的观察整个实验过程中严密观察细胞形态，倒置显微镜下（日本Olympus公司），细胞形态始终为多角形或星形，未发现异常形态细胞.　　2.2IGF1对兔关节软骨细胞增殖的影响　　2.2.1四唑盐法检测IGF1对细胞增殖的影响如Tab1所示，IGF1有促细胞增殖作用.作用后的细胞相对数分别为对照组的2.1倍，最大刺激浓度为100μgL-1.最大刺激效应发生在第4d.