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1、HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素的含量【关键词】鹿蹄草；槲皮素；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveTosetupamethodfordeterminingthequercetininPyrolacalliathaH.Andres.MethodHPLCmethodn(4.6mm×150mm,5μm)obilephaseofmethanol-0.1%phosphoricacid(50∶50),andthedetecting.ResultThestandardcurveethodissimple,accurate,highlysensitiveandrepr
2、oducible.ItcanbeusedforthequalitydeterminationofquercetininPyrolacalliathaH.Andres.Keyination鹿蹄草为鹿蹄草科植物鹿蹄草PyrolacalliathaH.Andres的干燥全草,习称鹿衔草,收载于2005年版《中华人民共和国药典》(一部)。其性温、味甘苦,具有祛风湿、强筋骨、止血之功效,用于风湿痹痛、腰膝无力、月经过多、久咳劳嗽[1]。现代药理研究表明,该药具有明显的抗菌、抗炎、促进免疫、改善冠心病症状等作用[2]。其主要含有鹿蹄草素、槲皮素等成分。本试验采用HPLC法测定鹿蹄草中槲
3、皮素的含量。 1仪器与试药Agilent1200系列高效液相色谱仪(包括四元泵,自动进样器,脱气机,紫外可见检测器,柱温箱)。鹿蹄草(广西玉林制药有限责任公司提供,由广西玉林制药有限责任公司蒙毅高级工程师鉴定)；槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号100081-200406,含量测定用,纯度在98%以上)。水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；流速：1.0mL/min；检测波长：370nm
4、；柱温：30℃；进样量：10μL。色谱图见图1。 2.2对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1mL含槲皮素46μg的溶液,作为对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备取鹿蹄草粉末适量,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-10%盐酸(3∶1)的混合溶液50mL,称定重量,回流1h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液作为供试品溶液。 2.4线性关系考察分别精密吸取槲皮素对照品溶液(46μg/mL)2、4、6、8、10mL,置于10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10μL,
5、连续进样2次,测定峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝5.3287×102X－0.2009,r＝0.9999,在0.092～0.46μg范围内呈良好的线性关系。 2.7稳定性试验取同一供试品溶液,分别于配制后0、4、8、12h依法测定峰面积,结果RSD＝0.56%,表明样品溶液在12h内基本稳定。 2.8加样回收率试验 取已知槲皮素含量的鹿蹄草粉末,取约0.5g,分别精密称定,平行称取6份,各加入一定量的槲皮素对照品,制备成供试品溶液,在所确定的色谱条件下进行测定。结果槲皮素平均加样回收率为99.24%,RSD＝0.7
6、0%,说明该方法准确可靠。结果见表1。表1加样回收率试验结果（略） 2.9样品测定取3个不同产地鹿蹄草,测定其中槲皮素含量,结果见表2。表2鹿蹄草中槲皮素含量测定结果(略) 3讨论本试验曾经考查了直接加甲醇超声后测定鹿蹄草中槲皮素的含量,结果色谱峰的峰形不理想,而且槲皮素的提取也不充分。对于水解条件的选择,本试验考察了不同浓度的甲醇及提取时间和盐酸浓度及酸水解时间的影响。结果显示,用甲醇-10%盐酸(3∶1)回流1h,能使鹿蹄草中的槲皮素以苷元形式水解完全。在色谱条件摸索时,发现流动相pH值对色谱峰的峰形及分离度影响很大,比较甲醇与不同浓度的磷酸溶液等多种溶剂系统,确定
7、流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50),得到的色谱峰峰形及分离度较好,并且基线稳定。【参考文献】 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.226. [2]罗定强,杨燕子,宋莉,等.中国特有鹿蹄草属植物的研究进展[J].中草药,2004,35(4)：463
