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1、HPLC法测定四季感冒片中连翘苷的含量【关键词】四季感冒片；连翘苷；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofPhillyininSijiGanmaoPianbyHPLC.MethodsDiamonsilODS1C18columnobilephase,detectionandfloL/min.ResultsThecalibrationcurveethodple,accurateandproper,thereduplicationoftheresultet
2、hodcanbeprovideforquantitativeanalysisofPhillyininSijiGanmaoPian.KeyaoPian；Phillyin；HPLC；contentdetermination四季感冒片收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第13册中,功能清热解表,用于四季风寒感冒,特别适用于体弱者,妊娠妇女因感冒引起的发热头痛、鼻流清涕、咳嗽口干、咽喉疼痛、恶心厌食等。处方由紫苏叶、荆芥、连翘、大青叶、防风、桔梗、陈皮、香附(炒)、炙甘草组成[1]。原标准中只有鉴别项检查,没有含量控制项。为了更好地控制四季感冒片的质量,我们对四季感
3、冒片处方进行了分析,方中连翘清热解毒、消肿散结,用于风热感冒、温病初起、温热入营、高热烦渴、神昏发斑、热淋尿闭,与本方主治一致,故选择连翘中连翘苷作为本品的质控指标,采用高效液相色谱法对四季感冒片中连翘苷的含量进行测定。本方法简便快速,稳定可靠,专属性强。 1仪器与试药高效液相色谱仪：SPD-10A,日本岛津；紫外分光光度仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H,上海科导超声仪器有限公司。连翘苷对照品(批号110821-200406,供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；四季感冒片(批号20060102、20060103、2006010
4、4)由河南百年康鑫药业有限公司提供。其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件采用DiamonsilODSIC18色谱柱；乙腈-水(25∶75)为流动相,流速1.0mL/min；检测波长为277nm。理论塔板数按连翘苷峰计算应不低于3000[2]。 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含40μg的溶液,即得。 2.2.2供试品溶液的制备 取本品20片,研细,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中。精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重
5、量。摇匀,滤过,精密量取续滤液10mL,蒸至近干,加中性氧化铝1.5g,拌匀,加置中性氧化铝柱(100～200目,3g,内径1cm)上,用70%乙醇70mL洗脱,收集洗脱液,浓缩至干,残渣加50%甲醇溶解,转移至5mL量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 2.3线性关系的考察精密称取连翘苷对照品,分别制成浓度为11.28、22.56、45.12、67.68、90.24μg/mL的5个对照品溶液,分别吸取上述对照品溶液各10μL进样,测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,以不同浓度为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程Y＝5.79568X＋1.8431
6、9,r＝0.9993(n＝5),表明连翘苷在0.1128～0.9024μg之间呈良好的线性关系。 2.6稳定性试验取同一供试品溶液,分别在0、2、4、6、8h测定连翘苷峰面积并计算连翘苷峰面积积分值的相对标准偏差,RSD＝1.75%(n＝5),表明制备的供试品溶液在8h内稳定。 2.7加样回收率试验取同一批号已知含量供试品(批号060104,20片重7.2182g,每片重0.3609g,连翘苷含量0.245mg/g)1.0g,研细,精密称定,共取6份,均分别加入连翘苷对照品适量,按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,进样量10μL,测定连翘苷峰面积并计算连
7、翘苷含量(见表1)。结果平均回收率为98.6%,RSD＝1.82%(n＝6)。表1加样回收率试验结果（略） 2.8样品测定按照供试品溶液制备方法制备供试液,共对3批产品进行了测定,结果见表2。表2连翘苷含量测定结果（略） 2.9系统适用性试验取缺连翘的样品,按供试品溶液制备法制备阴性样品后测定,在连翘苷相应位置无峰出现,说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图1。 3讨论 为了保证供试品中连翘苷提取完全,对供试品超声处理时间进行了考察,分别超声处理10、20、30、40、50min,测得样品中对应的连翘苷含量分别为54.78、78.23、88.25、8
8、8.53、88.43μg/片,试验结果
