hplc法测定维c银翘片中牛蒡苷和连翘苷的含量

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1、HPLC法测定维C银翘片中牛蒡苷和连翘苷的含量张武圣河南省中医院，河南郑州450006【摘要】目的：建立测定维C银翘片中牛蒡苷和连翘苷的含量测定方法。方法：采用高效液相法，色谱柱为DiamonsilC18柱（250nm×4.6mm，5μm），以乙腈∶0.2%磷酸水（30∶70）为流动相，检测波长：207nm，流速：1.0ml/min；运用外标法对其进行测定。结果：牛蒡苷线性回归方程为Y=67716X-264370，在95.4ng~1980ng范围内线性关系良好（r=0.9995），连翘苷性回归方程为Y=96437

2、X-716504，在21.18ng~423.6ng范围内线性关系良好（r=0.9991），牛蒡苷和连翘苷加样回收率99.66%、99.48%，RSD分别为0.90%和0.94%。3批维C银翘片牛蒡苷平均含量分别为10.17、10.06、10.21mg/g，连翘苷平均含量1.97、1.84、2.03mg/g。结论：该方法准确、简便、重复性好、灵敏度高，可用于对维C银翘片的质量评价及质量控制。.jyqkpoonsilC18柱（250nm×4.6mm，5μm）；柱温：25℃；流动相：乙腈-0.2%磷酸水（30∶70）；

3、检测波长：207nm，理论塔板数按连翘苷峰计算应不低于2000。2.2对照品溶液的制备取牛蒡苷和连翘苷适量，精密称定，分别加50%甲醇将其制备成浓度为0.2118mg/ml的连翘苷对照品溶液和0.954mg/ml的牛蒡苷对照品溶液。制备的对照品溶液各取1ml置10ml定量瓶中，加50%甲醇定制刻度，即得混合对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取本品数片，去除包衣，碾磨混匀，精密称取5g置具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称量质量，超声处理30min，放冷，补足失重，摇匀过滤，取续滤液10ml，加置中性氧化铝柱（100~

4、120目，2g，内径0.9cm）上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液置25ml定量瓶中，即得。2.4阴性对照溶液的制备按处方量制备不含牛蒡子和连翘的阴性对照药材，按“2.3”方法进行处理，得阴性对照溶液。2.5专属性试验精密吸取对照品、供试品及阴性对照溶液各10μl，注入高效液相色谱仪进行测试，结果阴性对照色谱中，在与对照品和药材出峰时间处没有相应的色谱峰，表明其他组分对牛蒡苷和连翘苷无干扰，结果见图1。2.6线性关系考察按以上色谱条件，分别用自动进样器进1、2、4、8、10、20μl，按以上色谱条件下进行测定，以峰

5、面积为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，得到线性回归方程牛蒡苷：Y=67716X-264370，r=0.9995，说明牛蒡苷对照品在95.4ng~1980ng范围内线性关系良好；连翘苷：Y=96437X-716504，r=0.9991，说明连翘苷对照品在21.18ng~423.6ng范围内线性关系良好。2.7精密度试验取同一对照品溶液，连续进样5次，每次10μl，分别记录牛蒡苷和连翘苷的峰面积，计算其精密度的RSD分别为1.61%、1.84%，表明仪器的精密度良好。2.8重复性试验取维C银翘片样品5份，按“2.3”

6、项方法将其制备成供试品并按照上述色谱条件测定牛蒡苷和连翘苷的含量，记录牛蒡苷和连翘苷的峰面积，计算RSD值分别为2.01%和2.14%，表明重复性良好。2.9加样回收率试验取已知含量（含10.17mg/g牛蒡苷和1.97mg/g连翘苷）的维c银翘片约0.5g，共9份，精密称定，分为3组，每组分别精密加入质量浓度已知的牛蒡苷对照品和连翘苷对照品0.8、1.0、1.2倍，按照以上供试品的制备方法制备供试品以及按上述色谱条件进行测定，结果显示牛蒡苷和连翘苷的加样回收率的RSD分别为0.90%和0.94%，见表1、2。2

7、.10样品的含量测定取3批维Ｃ银翘片品（110503、110602、110901），每批取6份，按照以上制备方法及色谱条件测定，记录色谱峰面积并计算，测定结果见表3。3讨论3.1流动相的考察实验中对不同系统的流动相进行了筛选考察，包括乙腈-水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液、甲醇-水溶液，结果表明：把乙腈-0.2%磷酸水作为流动相时效果最佳，色谱峰峰型及分离度均良好，且保留时间适宜，故选择乙腈-0.2%磷酸水作为流动相。3.2提取方法的考察维C银翘片为中药复方制剂，本实验主要对其进行了超声法和回流法进行对比，结果发

8、现超声法与回流法对二者含量影响不大，但由于超声法操作简便，故选其为提取方法。3.3吸收波长的考察维C银翘片中牛蒡苷［6］在208、224、280nm处均有最大吸收，连翘苷［7］在205、288、277nm处有吸收，通过综合考察，发现其二者在207nm处峰形较好，杂质干扰少，故选择波长为207nm。3.4层析柱的选择因维C银翘片中待测成分的含量较低，故选择过层析柱以防止其他