5氟尿嘧啶对肺腺癌a549细胞生长抑制作用机制的研究　

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1、5氟尿嘧啶对肺腺癌A549细胞生长抑制作用机制的研究作者：张德海张晴张翠云高振月【摘要】目的研宄5?氟尿嘧啶抑制人肺腺癌细胞生长的作用方式。方法用不同浓度的5?氟尿嘧啶处理体外培养的人肺癌A549细胞，应用MTT法、倒置相差显微镜和吖啶橙染色法分析检测A549细胞存活率的变化及细胞形态结构的变化。结果不同浓度的5?氟尿嘧啶处理A549细胞，随着药物浓度的增加和处理时间的延长，细胞存活率明显下降;且低浓度使细胞呈铺展状态，细胞质内空泡增多，吖啶橙染色显示酸性膜泡增多，高浓度使细胞变圆，出现凋亡状态。结论5?氟尿嘧啶能明显抑制A549细胞的

2、生长，低浓度诱导细胞发生自噬，高浓度引起细胞凋亡。【关键词】5?氟尿嘧啶;肺癌；自噬;凋亡[Abstract]ObjectiveTostudytheinhibitiveeffectof5?f1uorouracilonthegrowthofhumanlungearcinomacel1sWithdifferentconcentrationsof5?fluorouracilinvitroprocessingofhumanlungcancerA549cells，MTTassay,invertedmicroscopeandacridineoran

3、gestainingwereusedtodeterminecellviabilityandmorphologicalUsingdifferentconcentrationsof5?fluorouraciltodealwithA549cells,withtheincreaseindrugconcentrationandtreatmenttime,cel1survivalratedecreasedsignificantiy;andlowconcentrationof5?fluorouraci1inducedthecellspreadandi

4、ncreasedvacuolizationwithinthecytoplasm,acridineorangestainingshowedanincreaseinacidicvesicles,highconcentrationmadethecellroundandcell5?fluorouracilinhibitedthegrowthofA549cellssignificantly,withautophagybylowconcentrationsandapoptosisbyhighconcentrations.［Keywords］5?fl

5、uorouracil,lungcancer，autophagy，apoptosis5?氟尿嘧啶(5?fluorouracil,5?Fu)是临床上常见的抗肿瘤化疗药物，它可以抑制肿瘤细胞生长［1］，常用于治疗结直肠癌、消化道癌、乳腺癌、绒毛膜上皮癌等多种恶性肿瘤。5?Fu是一种嘧啶类似物，可在细胞内转化成不同的细胞毒性代谢产物，与DNA和RNA结合，从而干扰DNA和RNA的合成，从而起到抑制肿瘤细胞生长的作用，但其抑制肿瘤细胞生长的作用机制尚不清楚。近年来，国内外许多研究表明，5?氟尿嘧啶抑制肿瘤细胞生长是通过诱导细实现的［2,3］;而也

6、有研究证明，5?氟尿嘧啶能诱导细胞发生自噬［4］。本研究以人肺腺癌A549细胞为例，来探讨5?氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549细胞生长的作用机制，以期为临床治疗提供理论依据。1材料与方法材料人肺腺癌A549细胞，HAM'S/F?12细胞培养液（美国GIBCOBRL公司），胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），胰酶（上海生工），二甲基亚砜（Sigma公司）。5?氟尿嘧啶（深圳万乐药业有限公司）用二甲基亚砜（DMSO）溶解。细胞培养A549肺癌细胞系在含10%胎牛血清的HAM'S/F?12培养基中，置于37°C，5%C02饱和湿度的培养箱

7、中培养。每3d半量换液传代，实验中选用对数生长期细胞。5?Fu用DMSO溶解成lmol/L储存液_20°C保存，使用前用细胞培养液稀释成所需浓度。实验分组根据加入的5?氟尿嘧啶浓度不同将细胞分组:①对照组;②加药组（分别为5、10、20、40、80、100、200、300、400yM）。将各组细胞接种到24孔和96孔板中，每孔细胞浓度为2X104/ml,置于37°C、5%C02饱和湿度的培养箱中培养24h后加药，分别于加药后24、48h进行观察和分析。细胞形态学观察各组细胞加药24、48h后，倒置相差显微镜下观察24、48h细胞形态变化

8、。MTT法检测细胞琥珀酸脱氢酶的活性将上述培养于96孔板中的细胞根据实验分组加入不同浓度的5?氟尿嘧啶，于各组药物处理终止前4h每孔加入5mg/mlMTT液20u1，继续培养4h，然后小心吸出各孔内培养液，