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1、生物测定法在丹参亲水凝胶骨架片体外释放评价中应用探究［摘要］该研究探讨生物活性测定法在中药缓控释制剂评价中应用的适宜性，建立一种快速的多组分制剂体外释药评价方法，用表征总体行为的生物活性测定法代替目前单一成分的药物释放度测定法，以更好地指导缓控释制剂处方设计。通过HPLC测定不同溶出介质，不同释药速率及成分间不同配伍比例的丹参亲水凝胶骨架片中各有效成分（丹酚酸B、原儿茶醛、迷迭香酸）的累积释放度及紫外分光光度法测定释放液的抗氧化活性，对药物各成分经时曲线与总抗氧化活性经时曲线之间的相关性进行评价。发现各成分
2、的释放曲线与抗氧化活性经时曲线的相关系数r均大于临界r=0.898(P2.1.5精密度试验精密吸取混合对照品溶液，分别于同天重复进样6次，按2.1.1项下色谱条件测定峰面积，计算RSD,记作日内精密度；另精密吸取混合对照品溶液10uL，重复进样3次，连续进样3d，测定峰面积，计算RSD,记作日间精密度。原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的日内精密度分别为0.56%，0.41%，0.30%,日间精密度分别为0.53%，1.0%，0.94%,表明仪器精密度良好。1.原儿茶醛；2.迷迭香酸；3.丹酚酸B。1混合对照品溶
3、液（A）、空白辅料（B）及样品溶液(C)HPLCFig.1HPLCchromatogramsofmixedcontrolsolution(A),excipientsolution(B)andsamplesolution(C)表1原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B的回归方程、相关系数及线性范ETable1RegressionequationsandrangesofthreephenolicacidsfromSalviamiltiorrhiza2.1.6稳定性试验精密吸取同一供试品溶液10uL，分别于0，3，6，9，
4、12，18，24,36，48h进样，记录峰面积，考察其溶液稳定性，原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B峰面积的RSD分别为2.3%，1.7%,3.4%，表明供试品溶液48h内稳定性良好。2.1.7重复性试验取同一批号丹参骨架片(自制)，按2.1.2项下方法制备6份供试品溶液，进样10PL，记录峰面积，计算含量。丹酚酸B、原儿茶醛、迷迭香酸的平均质量分数分别为7.76%,0.043%,0.35%,RSD分别为2.7%,4.2%,3.4%(n=6),表明方法重复性良好。2.1.8加样回收率试验分别精密吸取已知浓度的供试
5、品溶液5mL(分别含有丹酚酸B116.57yg,迷迭香酸5.36Pg,原儿茶釀0.64ug),置于9支10mL量瓶中，分别精密量取含丹酴酸B、迷迭香酸、原儿茶醛对照品溶液置于9支量瓶中(低、中、高质量浓度组各平行3份)，加水振摇定容至10mL。分别用0.22urn微孔滤膜过滤后进样10uL检测，计算加样回收率，见表2。表2丹酚酸B、迷迭香酸、原儿茶醛的加样回收率Table2RecoveriesrateofthreephenolicacidsfromSalviamiltiorrhiza2.2释放度试验取自制丹
6、参骨架片6片，采用2010年版《中国药典》二部附录XD第2法［1］以纯水900mL作为释放介质，50r•min-1，（37±0.5）°C，于0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6,811定时取样511^，经0.22Pm微孔滤膜过滤，取续滤液注入液相色谱仪，分别测定丹酚酸B、原儿茶醛、迷迭香酸的峰面积，计算各成分的累积释放度，结果见图2。采用相似因子法［14］对迷迭香酸、原儿茶醛与丹酚酸B溶出曲线进行比较，相似因子分别为81.91，62.12（均大于50），表明各成分间释放速率无显著差异。2丹参骨架片3
7、个酴酸类成分的体外累积释放曲线Fig.2Drugreleasekineticsofactivecomponentsfromformulationsinvitro2.3抗氧化经时曲线的绘制取上述各个溶出时间点溶出液，0.22ym滤膜过滤，分别取0.5mL与0.1mmol-L-1DPPH乙醇溶液3mL反应30min，测定吸光度值，计算清除率。以溶出时间为横坐标，DPPH自由基清除率为纵坐标，绘制抗氧化经时曲线，结果见图3。3丹参骨架片各时间点释放液抗氧化活性经时曲线Fig.3Antioxidantactivit
8、ykineticsofreleaseliquidinvitro1.4成分经时曲线与抗氧化活性经时曲线的相关性分析考察抗氧化活性与累计释放度之间的相关性，以各成分各时间点累计释放度为横坐标，各时间点总抗氧化活性为纵坐标，绘制曲线，计算回归方程及相关系数r，结果表明，相关系数均大于临界值rO.001=0.898,说明成分经时曲线与抗氧化活性经时曲线相关性良好，见表3。表3成分累计释放曲线与抗氧化活性经时曲线相关性Ta
