丹参注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

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1、丹参注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响[]目的研究丹参注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，采用HE染色法观察脑组织形态学变化、透射电镜观察脑组织超微结构变化、黄嘌呤氧化酶法测定脑组织血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥法测定丙二醛(MDA)含量。结果丹参注射液组再灌注后与相应假手术组相比脑组织MDA含量降低、SOD含量升高(P<0.01)；丹参注射液组再灌注后与模型组相比脑组织中MDA含量降低，SOD含量升高(P<0.05)。结论丹参注射液通过降低脑组织中NDA的含量，升高脑

2、组织中SOD的含量，从而减轻脑缺血损害。　　[关键词]脑缺血再灌注；丹参注射液；超氧化物歧化酶；丙二醛　　[]R-33[]B[]1005-0515（2011）-12-041-02　　近年来，氧化应激学说在缺血性脑血管疾病中的地位日益重要[1]。脑缺血后氧化物生成系统和抗氧化系统之间的平衡被打破，组织内生成大量的自由基可以引起细胞膜脂质过氧化，从而导致细胞膜破坏、细胞溶解、组织水肿和线粒体功能下降等一系列损害作用[2]。本研究采用栓塞大鼠大脑中动脉并再灌注模型，观察丹参注射液对局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。　　1材料与方法

3、　　1.1材料动物为健康清洁级SD大鼠,雌雄各50只,体重300g-350g，由重庆腾鑫生物技术有限公司提供；主要仪器为2135型石蜡切片机(德国LEICA公司)，H-600IV型透射电镜(日本日立公司)，Olympus照相显微镜(日本)；试剂为丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物有限公司)，丹参注射液(正大青春宝药业有限公司)。　　1.2实验方法从50只大鼠随机抽出10只为假手术组，余进行造模；符合纳入标准的大鼠采用随机数字表方法均分为模型组、丹参注射液组，每组10只。参考Zealonga[3]的方

4、法,结扎大鼠颈外动脉，自颈总动脉分叉处向颈内动脉插入栓线18.5±0.5mm阻断大脑中动脉血流，造成局灶性脑缺血。术后将栓线尾部置于皮下，缺血2h后轻拔栓线造成血流再灌注。假手术组大鼠只进行麻醉和血管分离术。参考Longa[3]的方法进行评分，评分在1-3分的大鼠纳入实验分组。　　1.3治疗方法①丹参注射液组：从术前3天开始等量丹参注射液腹腔注射，大鼠体重(kg)*20/3ml，每日1次。②模型组按同样方法予以等量生理盐水腹腔注射。③假手术组同样抓取，不做其它任何处理。　　1.4标本的制备与检测　　1.4.1脑组织病理切片的制取分别

5、于缺血再灌注后取各组大鼠各4只，用10%水合氯醛(0.3ml/100mg)腹腔注射麻醉，打开颈部，暴露右侧颈总动脉，插管输注4%多聚甲醛约50ml灌注固定，断头取脑,取左侧大脑制作切片标本：在距额极2mm和距尾极1mm处各切一刀，取中间段制成光、电镜标本，观察神经细胞的超微结构变化。　　1.4.2脑组织MDA、SOD检测各组大鼠余下6只断头处死，在冰盘上迅速取脑，称取左侧大脑组织，放入玻璃匀浆管(玻璃匀浆管下端置于冰水混合物中)进行匀浆。将10%的组织匀浆在低温离心机中以3000r/min，离心10min，取上清液根据试剂盒说明，进

6、行含量检测。SOD采用黄嘌呤氧化酶法，MDA采用硫代巴比妥酸法检测。　　1.4.3HE染色切片经脱蜡脱水后哈瑞氏苏木精染核，1%盐酸酒精分化，氨水返蓝，伊红染色，脱水，透明后中性树胶封片。　　1.5统计学方法全部数据采用SPSS17.0统计软件，各项指标采用均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用方差分析，不同组间比较用q检验。　　2结果　　2.1假手术组与模型组、丹参注射液组大鼠脑组织MDA、SOD含量的比较(x±S)　　图表说明：1)在假手术组大鼠脑组织MDA、SOD的含量呈基础水平变化。2)模型组再灌注后与相应假手术组相比脑组

7、织MDA含量升高、SOD的含量降低,有极显著差异(P<0.01)。3)丹参注射液组再灌注后与假手术组、模型组相比脑组织MDA含量降低、SOD含量升高,有极显著差异(P<0.01)。　　2.2对缺血性再灌注后脑组织形态学观察　　2.2.1HE染色光镜下观察结果光镜下检查，模型组缺血侧大脑皮层和纹状体出现严重的神经细胞变性坏死，其中皮层锥体细胞表现为胞体固缩,核浓缩、深染，染色质浓缩、边聚，胞浆呈嗜酸性改变，细胞与周围组织形成显著的间隙，间质疏松，出现空泡性变性。而假手术组神经细胞核仁清晰、核圆形，核膜完整。丹参注射液组可显著改善上述病

8、理变化。图示如下：　　图1丹参注射液组脑组织HE染色(×10)　　（描述：脑组织坏死程度最轻，极少部分脑组织稍水肿。）　　2.2.2透射电镜下观察结果电镜下检查,模型组缺血侧大脑组织超微结构发生严重脱髓鞘病变，线粒体肿胀，粗面内质X扩