结核分枝杆菌mpt64重组母牛分枝杆菌免疫学特性

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1、结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌免疫学特性：柏银兰,薛莹,王丽梅,樊爱琳,张薇,何俊杰,康健,徐志凯【摘要】　　目的:研究结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫学特性。方法:用分泌表达MPT64的重组母牛分枝杆菌疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFNγ和IL12产生水平、CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。毒株攻击后对脾脏细菌负荷计数。结果:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫可诱导小鼠高水平

2、的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖明显,IFNγ和IL12含量增加,CD4+和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显,对MTBH37Rv攻击后有一定的保护作用。结论:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗候选。【关键词】结核分枝杆菌;母牛分枝杆菌;疫苗;MPT64　　［Abstract］AIM:ToevaluateimmunoprophylaxisofrebinantMycobacteriumvaccaesecretedMPT64ofMycobacterium

3、tuberculosis.METHODS:BALB/cmicemunizedvaccaesecretedMPT64ofMycobacteriumtuberculosis.ELISAmunizedmicesera.Splenocytesofimmunizedmicephocytespecificlysis.Thebacterianumbersinvaccinationanimal'slungandspleeningunits（CFUs）onplate.RESULTS:RebinantMycobacteriumvaccaes

4、ecretedMPT64ofMycobacteriumtuberculosiscouldinducehighlevelofspecificIgGantibodies,strongerTcellproliferationresponse,productionofIFNγandIL12,CD4＋andCD8＋cellpercentagesandCTLeffectinmice.AndanefficacyprotectionagainstMycobacteriumtuberculosisicemodel.CONCLUSION

5、:RebinantMycobacteriumvaccaesecretedMPT64couldinducehighlevelhumoralandcellmediatedimmuneresponsesinmiceandcouldbeusedasacandidateofnetuberculosis;Mycobacteriumvaccae;vaccine;MPT64　　非致病性分枝杆菌在生物种系上与结核病（Tuberculosis,TB）的病原体结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB）具有高度近

6、源关系,诸多生物学性状与后者相似,最能模拟MTB感染的自然过程,且其对人类致病性低或不致病,故其极具成为抗TB疫苗的潜力。母牛分枝杆菌（Mycobacteriumvaccae,MV）就是其中一种,它的生长速率比MTB快10倍,将MTB分泌型蛋白的基因转入后,在克隆基因本身的启动子作用下能稳定地表达重组分泌型蛋白［1］。MPT64是存在于MTB早期培养滤液中的一种主要分泌蛋白,具有较强的细胞免疫活性,还能诱发豚鼠发生迟发型超敏反应（delayedtypehypersensitivity,DTH）,因此,MPT64在TB疫

7、苗和诊断试剂方面表现出来的应用潜能引起研究者强烈的兴趣［2］。我们在前期工作中［3］成功构建了分泌表达MPT64的重组母牛分枝杆菌（rebinantMycobacteriumvaccae,rMV）,进一步研究其免疫学特性,以期为后续的疫苗研究奠定基础。　　1材料和方法　　1.1材料　　分泌表达MPT64的重组母牛分枝杆菌菌株rMVMPT64由本室构建［3］。羊抗鼠IgG2a、羊抗鼠IgG1购自SouthernBiotech公司;小鼠CD4/CD8双标记mAb购自Serotech公司;TRIzol、RNA酶抑制剂、CTL

8、检测试剂盒、MTT检测试剂盒均购自Promega公司;P815细胞（小鼠肥大瘤细胞,H2d）本室保存。BALB/c小鼠（雌性,6～8周龄,18～20g/只）,由第四军医大学实验动物中心提供。　　1.2方法　　1.2.1动物免疫及分组　　用rMVMPT64和MV免疫小鼠,每只剂量为105CFU/0.1mL,于背部皮下