高效液相色谱法测定小叶榕中牡荆素的含量

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1、高效液相色谱法测定小叶榕中牡荆素的含量【摘要】　　目的建立小叶榕中牡荆素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为迪马TC-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)，流动相为乙腈－1%醋酸（14∶86），流速1.0ml/min，柱温为25℃，检测波长340nm。结果牡荆素在0.0824~0.824μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9997；平均回收率为100.39%，RSD为2.20%。结论该方法简单、灵敏度高，可用于小叶榕中牡荆素的含量测定。【关键词】小叶榕牡荆素高效液相色谱　　Abstract：Objective：ToestablishanHPLCm

2、ethodforthedeterminationofViterxininXiaoyerong.MethodsLUNAODSC18BDS（250mm×4.6mm，5μm）obilephase.Theflol·min-1.Thedetection.ResultsThelinearrangeofViterxinethodissimple，rapidandaccurate.　　KeyicrocarpaL.f.的干燥叶，又名：细叶椿、细叶榕、垂叶榕，属桑科椿属常绿大乔木，高20~25m，生气根〔1~2〕。全年可采收，斩取叶和幼枝，除去树枝，取净叶片，晒干。小叶榕多生长于村边

3、或山林中，分布于我国的广西、广东、福建、台湾、浙江南部、云南、贵州等地，印度、缅甸、马来西亚等国也有分布。　　小叶榕既可作风景树、行道树，又具有药用价值。其树皮纤维可制鱼网和人造棉，茎、皮、果、叶、胶汁等均可入药，具有祛风清热、活血解毒、散淤利湿等功效。民间多用于治疗关节风湿痛、跌打损伤、小便不通、风火牙痛、急性痢疾及肠炎、疥癣、痔疮等病症。其叶、皮、果等提取的浸膏是治疗止咳、感冒类中成药的主要原料。　　小叶榕中的主要有效成分是黄酮类化合物，具有止咳祛痰、抗菌消炎的作用。小叶榕药用部位中黄酮类化合物的种类很多，其中以牡荆素的含量较高，并且生理活性较强，具有抗病毒、

4、抗甲状腺肿和抑制肿瘤细胞生长等作用。因此以牡荆素作为测定指标，有利于评价小叶榕药用部位的质量。　　采用高效液相色谱法测定小叶榕中牡荆素的研究尚未见报道。现报道如下。　　1器材　　LC-2010AH型高效液相色谱仪(日本岛津)；HS10260D型超声波清洗器(f超声工作频率40kHz、天津市恒奥科技发展有限公司)；AUm×4.6mm,5μm)；流动相为乙腈－1％醋酸（14∶86）；流速1ml/min；柱温25℃；检测波长340nm；进样量为20μl；牡荆素对照品浓度为0.0824mg/ml；在此条件下，色谱图如图1，牡荆素保留时间为30.417min，理论板数311

5、41。　　图1牡荆素对照品色谱图（略）　　2.1.2对照品溶液的制备精密称取牡荆素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.0824mg的溶液，即得。　　2.1.3供试品溶液的制备取小叶榕药材粉末(过40目筛)2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加30％乙醇25ml，密塞，称定重量，超声波振荡60min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。　　2.1.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定即得。小叶榕药材色谱图见图2。供试品中牡荆素保留时间为30.487min，理论塔板数36241。　　2.2

6、测定方法学研究　　2.2.1检测波长的确定取对照品溶液测定其紫外光谱。牡荆素在340nm处有最大吸收，所以检测波长选定为340nm。　　图2小叶榕药材色谱图（略）　　2.2.2线性关系考察精密吸取对照品溶液（0.0824mg/ml）1，2，4，6，8，10μl，按上述色谱条件注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积(A)为纵坐标，以牡荆素进样质量（B）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：A＝14.801+1135.9B，r＝0.9997。表明牡荆素在0.0824～0.824μg范围内峰面积呈良好的线性关系。　　2.2.3精密度实验精密吸取小叶榕药材供试品溶液20μl，连

7、续进样5次，测得峰面积平均值为388.1012，RSD为1.42%，表明测定的精密度良好。　　2.2.4稳定性实验取同一供试品溶液分别于1，2，4，8，12，24h依法测定。结果见表1。峰面积平均值为382.954。RSD＝2.11％。表明供试品在8h内稳定性良好。　　表1牡荆素含量测定稳定性实验结果（略）　　2.2.5重复性实验精密称取同一小叶榕药材粉末5份，按照上述方法制备供试品溶液，测定并计算牡荆素含量（见表2）。药材中牡荆素含量测定的RSD为3.38％，说明本方法的重复性好。　　2.2.6回收率实验采用加样法进行回收率实验。精密称取1.0g小叶榕药材粉末（

8、含量0.0