竹节参总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖抑制作用的研究

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1、竹节参总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖抑制作用的研究【摘要】　　目的研究竹节参总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的影响。方法酶消化法进行胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞的原代培养，MTT法检测TSPJ对滑膜细胞增殖的影响，流式细胞仪检测TSPJ对滑膜细胞凋亡率的影响。结果TSPJ可明显抑制体外培养的CIA大鼠滑膜细胞的增殖，TSPJ可诱导滑膜细胞凋亡。结论TSPJ可有效抑制体外培养的胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖，这可能是其治疗类风湿关节炎的机制。【关键词】竹节参总皂苷类风湿关节炎滑

2、膜细胞细胞凋亡Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsoftotalSaponinsofPanaxjaponicusontheproliferationandapoptosisofsynoviocytesincollagen-inducedarthritisratsinsynoviocyteswereculturedbyenzymaticdigestion.Synoviocyteswereincubatedwithvariousconcentrations

3、oftotalsaponinsofPanaxjaponicusforhours.SynoviocytesproliferationwasdeterminedbyMTTcolorimetricassay.TheapoptosisrateofsynovialcellswasexaminedbyflowsaponinsofPanaxjaponicushadmarkeddose-dependentinhibitoryeffectsonsynovialcellproliferation.Apoptosisr

4、atewasinereasedwiththeelevationofconcentrationoftotalsaponinsofPanaxresultsofthisstudysuggestthatthetotalsaponinsofPanaxjaponicushasremarkablesuppressiveeffectsonproliferationofsynoviocytesofCIAratsinvitro.ThismaybethemechanismofRAtreatment.Keywords:T

5、otalsaponinsofPanaxjaponicus；Rheumatoidarthritis；Synoviocytes；Apoptosis类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为主要特征的自身免疫性疾病,其关节滑膜细胞功能的改变直接影响病理进程。在多种炎性因子的刺激下,关节滑膜细胞肿瘤样无限增生,对关节软骨、骨造成进行性破坏,最终导致关节畸形和功能障碍。因此，对关节滑膜细胞的保护在治疗中具有重要意义。竹节参RhizomaofPanaxjaponicus系

6、五加科人参属植物竹节参的干燥呈竹鞭状根茎，民间常用其治疗病后虚弱、风湿痹证、筋骨疼痛、虚损劳伤等疾患［1］。研究表明竹节参主要活性成分为皂苷类［2］。本实验研究竹节参总皂苷体外对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的影响，并检测滑膜细胞凋亡率的变化，来探讨竹节参总皂苷对类风湿关节炎的可能作用。1材料药物竹节参采于湖北省宜昌五峰山区，经鉴定为五加科人参属植物竹节参的根茎，洗净，晒干，打成粗粉。动物清洁级雄性Wistar大鼠，体重110～125g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，许可证SCXKX

7、X-0007。试剂牛Ⅱ型胶原，Chondrex公司产品；不完全弗氏佐剂和EDTA为Sigma公司产品；胰蛋白酶，Difco公司进口分装；Ⅰ型胶原酶、四甲基偶氮唑蓝(MTT)及二甲基亚矾(DMSO)均为Amresco公司产品；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司产品；PRMI-1640培养基和VybrantApoptosisAssayKit#为Invitrogen公司产品。方法.1药物制备　　竹节参药材粗粉经75%乙醇回流提取浓缩后用水饱和的正丁醇萃取，再浓缩干燥后加水溶解后上D101大孔吸附树

8、脂，水洗，10%乙醇洗，然后收集70%乙醇洗溶液部分，浓缩后干燥即得竹节参总皂苷粉末。用RPMI-1640培养液稀释竹节参总皂苷至所需浓度，μm的微孔滤器除菌分装，4℃保存备用。.2大鼠CIA模型的制备［3］将一定量的Ⅱ型胶原溶于mol/L的冰醋酸，在4℃下搅拌充分溶解，置4℃冰箱过夜。将Ⅱ型胶原溶液滴加至冷的不完全弗氏佐剂(IncompleteFreund'sadjuvant,IFA)中，将二者等体积混合，充分乳化，制成CⅡ乳剂。置4℃冰箱保存备用。每只大鼠分5点皮内注射Ⅱ型胶原